[精品]叶绿体色素的提取、分离及其理化性质鉴定

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1、叶绿体色素的提取分离及其理化性质实验名称：叶绿体色素的提取分离及其理化性质指导老师：实验人员：实验地点：摘要本实验通过无水丙酮萃取2g加CaC03和石英磨碎菠菜叶片中的叶绿素来研究叶绿素的荧光、皂化、吸光光谱等的性质。从实验可知道叶绿色提取液的透射光为绿色，反射光为暗红色；在色素层析中从上至下依次是：胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b；在叶绿素分子中MQ的取代作用中经水浴加热后的溶液颜色变为深绿色，比对照试管中的溶液颜色更深；皂化作用溶液分为两层，下层溶有皂化的绿色的叶绿素a和叶绿素b（以及少量叶黄素），上层溶有黄色的胡萝卜素和

2、叶黄素。一，实验原理（一）提取:叶绿体屮含有叶绿索（叶绿索a与b）和类胡萝卜素（胡萝卜索和叶黄索）,这两类色索均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。（二）分离：当溶剂沿支持物不断向前推进吋，由丁•叶绿体中不同色素分子结构不同，在两相（流动和M固定相）间具冇不同的分配系数，因此它们移动速率不同。对叶绿体色素进行层析口J将不同色素分离。（三）理化性质的观察：叶绿索是一种二竣酸酯，在碱作用下，发生皂化反应；在弱酸作用下，叶绿索中镁可被氢原子取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，叶绿素具有荧光，

3、故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿索与蛋口质分离后，破坏更快二，实验目的以植物叶片组织为材料，提取叶绿体色索;以纸层析法分离其成分;鉴定叶绿体色索的理化性质.三，实验器材和试剂1、材料：菠菜2、用具：天平、研钵、三角漏斗、滤纸、层析缸、毛细管、分光镜、呆筒、烧杯、试管等3、试剂：丙酮、碳酸钙、层析液（石油醯:丙酮=25：3）,20%KOH-甲醇、乙醯、l%HCk醋酸铜四，实验步骤（一）叶绿体色索的捉取1•取新鲜菠菜叶片2克，擦干，去中脉，剪碎放入研钵；2.加入少许石英

4、砂和CaC03,再加入无水内酮10ml,研磨成匀浆，再加内-酮15ml;3.用漏斗滤去残渣,得叶绿体色素提取液（置于暗处）（二）纸层析分离叶绿体色素1.层析样纸制备，将优质滤纸剪成3cmX9cm的长条，将一端剪成小央留约1cmX0.5cm的窄条；2.点样，用细玻璃棒蘸収叶绿体色素提収液点于层析纸的窄条上端中央部，用吹风机吹T后在原处重复点样7-8次；3.展层，在层析缸屮加入3-5ml层析推动液撚示将已点样的层析纸插入缸的侧壁槽内，调节纸条使窄条1/2部分浸入推动液中，盖好盖子，于阴暗处展层约lOmin,即可在层析纸上分辨出4种不同

5、的清楚色层；（三）叶绿体理化性质的观察1.荧光现彖的观察取浓的叶绿体色素提取液化3ml,在透射光和反射光下观察叶绿体色素提取液的颜色.2.皂化作用在观察过荧光现象的叶绿体色素提取液中加入2ml的20%KOH-甲醇溶液，充分混匀.吹打5分钟;沿试管壁缓慢加入3ml乙醯+4ml的蒸憎水,边滴加边摇动，直至看到溶液逐渐分为两层为止.对照不加KOH■甲醇溶液.3.叶绿素分子中Mg2+的取代作用取2只试管，分别加入2ml叶绿体色素提取液，第1只作为对照，第2只加入数滴5%HC1,摇匀，观察溶液颜色变化.当溶液变褐后，再加入少量醋酸铜粉末，并

6、微加热.与对照比较，观察溶液颜色变化，并解释原因.五，实验结果1.色索层析条带2.叶绿体理化性质的观察1）荧光现象的观察溶液的透射光为绿色，反射光为暗红色。因为叶绿素吸收光量子而转变为激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回基态吋可发射出红光量子，因而产生荧光。2）皂化作用溶液分为两层，下层溶冇皂化的绿色的叶绿素a和叶绿素b（以及少量叶黄素），上层溶启黄色的胡萝卜素和叶黄素。3）叶绿素分子中的取代作用a.经水浴加热后的溶液颜色变为深绿色，比对照试管中的溶液颜色更深。b.经水浴加热后的溶液颜色先略微变黄，然后变为深绿色。因为叶绿

7、素中的镁可以被氢离了所取代而呈褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为很稳定的铜代叶绿素，其在光下不易被破坏。六，注意事项：1）色素的提取与分离层析均应在弱光或暗处进行，以防止光对色素的破坏，影响实验结果。2）皂化反应的叶绿体色素溶液易乳化使溶液浑浊，可放在35〜45°C水浴中摇动，白色絮状物消失，溶液变得透明，H•分层明显。七，思考题1•研磨捉取色素时加入CaCO3有什么作用？答：加入CaC03可以防止叶绿索的某些成分在研磨时不被破坏。2•哪些条件会影响实验结果？1）叶绿色素提収液的保存条件2）试剂的溶度以及用量八，参考文献