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《中药粉末无菌检查法验证》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、***无菌检查方法学验证为了保证本品无菌检查方法的检验质量，确保检验结果的准确性和可靠性，根据《中国药典》(2010年版)要求，我们对杆*的无菌检查进行了方法学验证考察。验证结果如下:1、菌种：大肠埃希菌[CMCC(B)44102]金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]枯草芽抱杆菌
2、CMCC(B)63501]生他梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供，以上菌种所用菌株传代次数均未超过5代，符合验证试验要求。2
3、、材料和仪器2.1供试品：***,批号:20130402,滨州蓝海中医药科技研究中心提供,标示:高压灭菌。***,批号：20130402,滨州蓝海中医药科技研究中心提供，标示：辐照灭菌(2.8kGY)o2.2培养基：营养琼脂培养基(批号1103162中国药品生物制品检定所)营养肉汤培养基(批号101215屮国药品生物制品检定所)玫瑰红钠琼脂培养基(批号110222小国药品生物制品检定所)改良马丁培养基(批号110211中国药品生物制品检定所)改良马丁琼脂培养基(批号101028中国药品生物制品检定所)硫乙醇酸盐流体培养基(批号110214中国药品生物制品
4、检定所)蛋白月东水培养物(批号100803屮国药品生物制品检定所)2.3仪器LRH-250A生化培养箱（广东省医疗器械厂）YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业）HH-B11-600电热恒温培养箱（天津实验仪器厂）9240MBE数显鼓风不锈钢干燥箱（上海博迅有限公司）HZY-III型智能集菌仪（杭州高得医疗器械有限公司）全封闭集菌培养器（杭州高得医疗器械有限公司）2.4稀释剂0.9%无菌氯化钠溶液0.1%蛋白月东水溶液3、菌液制备（1）将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孑包杆菌的新鲜培养物分别接种至10ml营养肉汤中，接
5、种生泡梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基10ml中，30°C〜35°C培养18〜24小时，取此培养液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10心〜10巴使菌数小于100cfu/ml,见表1。（2）接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基10迪屮，30°C〜35°C培养18〜24小时，取此培养液lml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10一5〜10",使菌数小于100cfu/ml,见表1o（3）将白色念珠菌的新鲜培养物分别接种至10ml改良马丁液体培养基中,23°C〜28°C培养24〜
6、48小时，取此培养液lml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液屮，采用10倍递增稀释法，稀释至10~5〜10”,使菌数小于100cfu/ml,见表lo（4）将黑曲霉的新鲜培养物接种至10ml改良马丁琼脂培养基中，23°C〜2FC培养5〜7天,加3ml〜5ml0.9%无菌氯化钠溶液,洗下霉菌砲子，吸出菌液，取lml菌液加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至IO,〜10巴使他了数小于100cfu/ml,见表lo表1活菌预试验一一活菌计数166745356598550263665359628648平均值64.5705357.560.585
7、.5494培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌、生砲梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照,培养3天;取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空口对照，培养5天。逐日观察结果。结果见表2表2：培养基灵敏度检查结果培养基菌种管数观察结杲Id2d3d4d5d硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球菌1+++2+++铜绿假单胞菌1+++2+++枯草芽抱杆菌1+++2+++牛砲梭菌1+++2+++空白组——改良
8、马丁培养基口色念珠菌1+++++2+++++黑曲霉1+++++2+++++空口组——”表示无菌生长。“+”表示生长良好结果判定：空白对照管无菌生长，加试验菌的培养基管均生长良好，该培养基的灵敏度检查符合规定。5.检验方法验证5.1预实验5丄1采用了直接接种法，取本品0.5g,分别直接加入到100ml、200ml、500ml体积的培养基进行培养，经过试验发现，由于本品为屮药细粉，在培养基小形成混悬样溶液，影响了本品培养结果的观察，所以本品不宜采用直接接种法进行本品的无菌检查。5・1・2改用薄膜过滤法，取木品0.5g,加0.9%无菌氯化钠溶液50ml,摇匀，
9、然后通过薄膜过滤，结果中纱细粉将薄膜滤孔完全堵塞，不能过滤，尝试采用先离心后过滤
