DNA的粗提取与鉴定和血红蛋白的提取和分离

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1、DNA的粗提取与鉴定和血红蛋口的提取和分离溶解核内DNA：滤屮加入2g/mL氯化钠溶液过滤：用纱布滤得含DNA的滤液样iWi处理凝胶色谱操作一、找出DNA的粗提取与鉴定操作的單误提取血细胞核物质：1、猪血中加入蒸係水迅速搅拌。2、滤纸过滤：除去细胞膜等破碎物，得滤液3、原理：蒸僻水相対于细胞内液是低渗溶液，细胞吸水涨破，玻璃棒搅拌加速DNA溶解过滤：除去蛋白质，得滤液析出含DNA的黏稠物：向滤液屮加入蒸憎水，并玻璃棒不停搅拌，直到丝状物不再增加时，停止搅拌。过滤：用多层纱布过滤，含DNA的黏稠物留在纱布上DNA黏稠物再溶解：将其放在2g/mL的氯化钠溶液中溶解对DNA进-涉提纯：滤液

2、中加入与滤液体积相等的、冷却的95%的酒精，静置2〜3min,溶液屮会出现白色丝状物，即粗提取的DNADNA鉴定：DNA在水溶液屮遇二苯胺变成淡蓝色二、找出血红蛋白的提取和分离错误红细胞洗涤：1、采集血样，超速短吋离心，取红细胞，倒入烧杯加等体积的生理盐水，缓慢搅拌lOmin,再低速离心，重复洗涤三次,直到溶液呈淡黄色分离出干净的红细胞。2、向红细胞中加入等体积的蒸憎水和浓度40%的卬苯搅拌lOmin3、将混合液以200()r/min离心lOmin,分离出绘下层暗红色透明液体4、将盛有血红蛋白溶液ImL的透析袋放入300mL浓度为20mmol/L磷酸缓冲液中透析2小吋。1、凝胶色谱柱

3、的装填：用蒸懈水溶胀凝胶，分两次均匀填入色谱柱，在约50cm的操作压一川300ml浓度为20mmoL/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12h,以去除凝胶中的气泡2、打开流出口，使缓冲液与凝胶面平齐,关闭出口3、样品的加入和洗脱(1)用吸管将lml样品逐滴滴入凝胶面上，打开出口，使校品渗入凝胶床内后，关闭出口。(2)小心加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度示，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。(3)待红色的蛋白质从色谱柱底端流出时°,用试管收集流出液，每收集一管，连续收集。三、例题例1:也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实鱼类血细胞鸟类血细鷹扁孔类血细

4、躯lol一二三关于DNA粗提取的实验材料的选择,验材料。请据图回答问题：（1）鸡血细胞中红细胞,家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中细胞的数目较多，可以提供丰富的o（2）实验前由老师制备血细胞液提供给同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是红堀胞淋巴细恿（3）生活在牧羊区的人们，采取牛、羊号和马血较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是，这是因为这些动物和人类_样。但若改用动物的肝脏做实验材料，实验能顺利进行，这是因为o（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加程序，使组织细胞更易分离。答案：⑴有细胞核红DNA⑵鸡血细胞液中DNA相对含量高⑶很难提取到DNA红细胞

5、无细胞核肝细胞有细胞核⑷研磨例2：红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其化脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：、、和O（2）实验前取新鲜的血液，要切记在釆血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是②以上所述的过程即是样吕处理，它包括、、收集血红蛋白溶液。（3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗他离。①透析的目的是o②透析的原理是o（4）然后通过凝胶色谱法将样品

6、进一步纯化，最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。①样品纯化的目的是。②血红蛋白有什么特点？o这一■特点对进行蛋白质的他离有什么意义？答案：⑴样品处理粗分离纯化纯度鉴定⑵①防止血液凝固②红细胞洗涤血红蛋白释放⑶①去除相对分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进岀，而大分子则保留在袋内⑷①通过凝胶色谱法，将相对分子质量大的杂质蛋白除去②呈现红色在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这使血红蛋白的分离过程非常直观大简化了实验操作一、基础知识1、提取生物大分的基本思路：选用一定的或方法分离具有不同——或的生物大分子。2、概念：就是利用DNA与、和等在和_方

7、面的差异，提取DNA,去除其他成分。3、方法：DNA和蛋白质等其他成分在不同同浓度的溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的就能使NDA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相扫，以达到分离的目的。DNA不溶于,但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受的咼温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能分解，但对DNA没有影响。DNA的鉴定：在的条件下，DNA遇二苯胺会染成o4、蛋白质分离的原理：大多数凝胶内部是由构成的小球体