控制菌检查(彩片)-仅供参考

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1、控制菌检查药品控制菌检查包括：大肠杆菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌。规定不得检出。控制菌的检查方法须根椐待检菌的特性进行。取供试液（1:10）10ml相当于供试品1g、1ml、10cm2。直接或处理后接种，经增菌培养、分离培养后，进行革兰染色、生化试验与血清学鉴定等项检查来确定。第一章大肠杆菌检查法一、简述•大肠杆菌即大肠埃希菌，是人和温血动物肠道内的栖居菌随粪便排出体外。在药品中检出大肠杆菌表明该样品受到人和温血动物的粪便污染。•大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。为保证人体健康，口服药品必须检查大肠杆菌。•2

2、000年版中国药典规定检验大肠杆菌方法为MUG—I法，即用4—甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）和靛基质试验检查大肠杆菌。这是一项新技术。原理：实验证明96%的大肠杆菌含β-葡糖苷酸酶（β-glucuronidase,GUD），约10%的沙门菌属一些菌种也含此酶。MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍易于观察，没有主观性，因而用MUG鉴定大肠杆菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。单一的MUG鉴别大肠杆菌其漏检率达6%，鉴于98%的大肠杆菌靛基质实验为阳性，故将MUG-靛基质实验结合，用EMB琼脂平板分离，辅以IMViC实验，在

3、理论上可使大肠杆菌的检出率达99%。本法的检验周期短。2、检验步骤:供试液→增菌培养→接MUG→靛基质→分离培养→革兰染色镜检→生化鉴定。二、检验程序供试品供试液1：10BL增菌培养液分离培养36±1℃18~24h无菌落生长MUG蛋白胨EMB或麦康凯琼脂平板第二次报告36±1℃5、24h靛基质36±1℃18~24h第一次报告MUG阳性、靛基质阳性：疑似菌落MUG阴性、靛基质阴性：纯培养：MUG阳性、靛基质阴性：36±1℃18~24hMUG阴性、靛基质阳性：革兰染色、生化试验36±1℃24~48h报告（10ml）三、对照用菌液的制备药典规定的阳性对照试验是必须做的

4、。阳性对照菌须加入供试液中与供试品检验同时进行平行试验。制备：临用前用接种环取大肠杆菌[CMCC（B）44102]的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至灭菌的营养肉汤培养基中（5ml/支），36℃培养18~24h。（把它定为浓菌液）再按10倍系列稀释，取1ml营养肉汤菌悬液（浓菌液），加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10-1，再取另一只吸管吸取10-1菌液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10-2…以此类推，最终稀释到含活菌数在50~100个/ml，同时用营养琼脂平板计数。对照菌液的制备在专用的超净台四、供试液制备一般性供试品的供试液制备见菌落

5、计数：抑菌性供试品的供试液制备：（在试验中，按常规检查法加入规定量的对照菌，不能检出时，该项控制菌检验结果无效，须认真研究原因，重点考虑药品的抑菌作用并制定灭活处理方法。）1、稀释法：又叫扩大培养基法取规定量的供试品种入较大体积的培养基中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度。适用于：抑菌作用不强的各类中西药品2、离心沉淀集菌法取规定量的供试液（1：10取10ml）于无菌刻度离心管中，3000r/min离心30min，移去上清液，留底部集菌液约2ml，并稀释该供试液至原规定量。如有不溶性药渣，可先以500r/min离心5min，取全部上层液，再按上述方法集菌处理。

6、适用于：抑菌作用不强的各类中西药品。（固体制剂及液体制剂）3、薄膜过滤法•取规定量的供试液（1：10液20ml）于稀释剂200ml中，摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm、孔径不大于0.45±0.02μm微孔滤膜的过滤器内，过滤，用稀释剂冲洗滤膜，每次不少于100ml,一般冲洗3次，抽干取出滤膜，剪成2半分别加入样品和阳性对照增菌培养基中进行增菌。适用于：液体、乳剂、或通过离心可除去不溶性药渣取其溶液的固体制剂。如：大败毒胶囊——含有动物类药材——控制菌检查大肠杆菌、沙门菌。用离心沉淀集菌法（一次低速离心）加薄膜过滤法，阳性对照正常检出。薄膜过滤4、中和法又称

7、灭活法。在供试液中加入相应的中和剂以减除供试品中抑菌成分的作用。如：含1%对氨基苯甲酸约1~5ml的BL增菌液（100ml）用于磺胺类药物。5、沉降法取规定量供试液，自然沉降5min，取上层液于100ml增菌液中。本法适用于难溶于水的抗菌制剂。五、增菌培养1、增菌培养基：胆盐乳糖培养基（BL）分装成100ml/瓶121℃高压灭菌20min备用。（药品中污染的控制菌数量少、分布不均，且多受药物影响呈亚致死状态，适宜的增菌培养方法和高灵敏度的培养基是提高阳性检出率的关键。）2、 增菌目的：使细菌在其生长繁殖，利于进一步分离和鉴定，称之为增菌培养。3、方法：取灭菌的胆

8、盐乳糖培养基3瓶（100