瑞氏-吉姆萨染液配法

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1、简介英文拼写    Wright'sstain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇 。后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。使用方法瑞氏（Wright'sstaim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlemblue）和酸性染料黄色伊红（EostmY）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着

2、色。甲醇ME（瑞氏染料）----→M++E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。染液配制(1)瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料

3、放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。(2) 缓冲液：●缓冲液作用：○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。○缓冲液须保

4、持一定的pH使染色稳定，PBS的pH一般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。缓冲液配制（pH6.4~6.8，弱酸性）：配方1：　　　　　　　　配方2：1%KH2PO430ml　　　　　M/15KH2PO473.5ml1%Na2HPO420ml　　　　M/15Na2HPO426.5mlH2O(新鲜)　　　　　　　　加至1000ml置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。姬姆萨（Giemsa'sstain；天青-伊红）染色1

5、．姬姆萨染料是伊红(AzurIIEqsin)和天青（蓝）2号合成的。2．姬姆萨染料（Giemsa,天青-伊红）染液配制：姬姆萨染料（粉末）　　　　0.5g或7.5g甲醇（AR）　　　　　　　　33ml或500ml甘油（AR）　　　　　　　　33ml或500ml●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于56℃水温箱内，90～120分钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越长越好。●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液1ml，加DDH2O10ml混匀。即可

6、使用。染色步骤（1）先用甲醇固定2～3分钟。（2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液15～30分钟。（3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。染液鉴定瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定：1．取1滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。2．取1滴染液加1滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH是否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。混合染色瑞氏染色(Wrig

7、ht's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色：●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒着色较清晰,色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。染色步骤:1.先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖；2.稍等片刻再加姬姆萨染液2-3滴加减(根据涂片上细胞多少及

8、增升程度酌情而定)；3.稍等1-2分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液形成表面张力而终止染色液加入；4.染色30-40分钟；5.分色：用自来水缓缓冲洗至少3分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。吉姆萨染液配法：　　以1g的姬姆色素染料加入66ml甘油，混匀，60度保温溶解两小时，再加入66ml甲醇混匀，即配成姬姆色素原液，此原液用前用PBS（6.