细菌培养与生化的鉴定技术

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1、志贺菌和大肠埃希菌鉴定1411321H8王诗婷（主写）1411321133林翠翠14H321139刘小玲实验目的：1.掌握伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌在各种培养基的生长现象以及生化反应的操作方法。2.熟悉常用的细菌培养方法和生化反应的结果及报告方式。3•应用分离、鉴定伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌，用于临床各类标本中志贺菌和大肠埃希菌的检验实验内容：无菌操作、将伤寒沙门菌的在SS平板，中国蓝琼脂平板，血平板上接种与培养。乙型副伤寒沙门菌在SS培养基，屮国蓝琼脂平板，血平板上接种与培养。观察培养后的细菌菌落特征以及形态染色特点观察。血平板的生长现象观察，糖发酵试验、IMViC试验、KIA

2、试验、等生化鉴定，大肠埃希菌和志贺菌的血清学鉴定。实验方法：（—）准备细菌菌种：伤寒沙门菌，乙型副伤寒沙门菌培养基：SS琼脂培养基、屮国蓝琼脂培养基、血平板、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、葡萄糖蛋口豚水、蛋口月东水、枸盐酸盐培养基、克氏双糖铁斜面、MIU培养基。试剂：靛基质试剂、V・P试剂、甲基红指示剂。其他：接种环（针）、酒精灯、记号笔、恒温培养箱。（二）方法将细菌无菌操作接种到相应培养基。接种后，将培养基放置35°C培养18〜24小吋，观察结果。注意靛基质试剂应沿着管壁缓缓加入，而V・P试剂滴加后要充分摇匀。实验结果:菌落培养基SS平板中国蓝平板血平板伤寒沙门菌直径l-2mm

3、无色菌落、圆形、表面隆，边缘整齐、光滑湿润、不透明，中间无黑点直径2-3mm圆形无色菌落基于平板蓝色、表面突起、边缘整齐、光滑湿润、不透明直径2mm灰口色菌落、圆形、表面隆起，边缘整齐、光滑湿润、不透明无溶血现彖乙型副伤寒沙门菌直径2-3mm圆形无色菌落、表面隆起、边缘整齐、光滑湿润、不透明，中间有黑点。直径3mm圆形无色菌落、表面隆起、边缘整齐、光滑湿润、半透明直径2mm灰白色菌落、鬪形、表面隆起，边缘整齐、光滑湿润、不透明无溶血现象细菌在同休培养基的生长现象和菌落特征实验分析：中国蓝琼脂平板：乙型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌不分解乳糖，分解蛋口月东产碱，使得小国蓝不发生反应，呈无色，

4、可与玫瑰红反应变红。菌落成无色，圆形的单一菌落。SS琼脂平板：乙型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌均不可分解乳糖，可少量分解蛋白）1东产碱，使PH上升，使得中性红更黄。因SS平板含有硫代硫酸钠，促使对乙型副伤寒沙门菌着色，细菌的产物反应呈黑色的菌落血平板：乙型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌在平板均呈灰口色、圆形的单一菌落、无溶血。革兰染色结果:副伤寒沙门菌革兰染色结果分析：综上实验所述所得实验结果可知沙门菌属为革兰阴性菌，多数有周鞭毛，能运动，无荚膜，无芽胞。生化管实验结果:细菌的生化试验结果及判断菌种牛化反应培养基ktaVPMR斜胖产HMIU葡萄糖乳糖甘露醇面层气2S副伤寒沙门菌kA+++菌种生

5、化反应培养基副伤寒沙门菌———+++伤寒沙门菌———++——+++伤寒沙门菌人A血清学试验菌种试验结果生理盐水AF多架血清04血清09血清副伤寒沙门菌无++伤寒沙门菌无++副伤寒沙门菌伤寒沙门菌血清学试验结果分析:沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌0抗原多价血清与0、H、Vi抗原的单价因了血清。综上实验所述沙门菌多价血清作玻片凝集试验均为阳性。氧化酶实验结果:左为伤寒沙门菌，右为乙型副伤寒沙门菌触酶实验结果:左为伤寒沙门菌，右为乙型副伤寒沙门菌结果分析：氧化酶试验：沙门菌不具有氧化酶，不能将二甲基对苯二胺氧化成红色物质，呈阴性。触酶试验：沙门菌具有触酶，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，

6、继而出现气泡。左：伤寒沙门菌右：副伤寒沙门菌左：伤寒沙门菌右：副伤寒沙门菌伤寒沙门菌生化管副伤寒沙门菌生化管实验分析：KIA试验：从实验结果可分析出在副伤寒沙门菌斜面呈碱性，深层呈酸性，说明细菌只分解G不分解乳糖。细菌分解培养基中的含硫氨基酸，可以产生硫化氢，硫化氢与培养基中的枸椽酸銭铁起反应，产生不溶性黑色硫化亚铁沉淀，并冃该培养基产生气体。在KIA伤寒沙门菌斜而呈碱性，深层呈酸性，说明细菌只分解G不分解乳糖，不产生气体，细菌分解培养基中的含硫氨基酸，可以产生硫化氢，硫化氢与培养基屮的枸椽酸鞍铁起反应，产生不溶性黑色硫化亚铁沉淀，MIU试验：从实验结果可分析出在伤寒沙门菌屈屮穿刺线

7、模糊，但周围琼脂浑浊，所以细菌具有动力。不分解尿素产胺，但是可分解葡萄糖产酸，在腋酶屮呈黃色，即呈现为阴性。因没有色氨酸酶，不分解色氨酸，不能使靛基质与对二甲氨基苯甲醇反应，生成红色物质，所以呈现无色，所以为阴性。大肠埃希菌菌穿刺线模糊，周围琼脂浑浊，具有动力。不分解尿素产胺，在腺酶中呈黄色,即阴性。不分解色氨酸，不可使使靛基质与对二卬氨基苯甲醇反应，生成红色物质，所以为阴性。糖（醇、昔）类发f试验：从实验结果可分析出副伤寒沙门菌可分解葡萄糖、甘露醇产酸，