黄曲霉毒素B1作业指导书

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1、食品中黄曲霉毒素Bl残留量的测定方法（酶联免疫法）1适用范围本方法适用于食品中黄曲霉毒素B1残留量的测定。2引用文献GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测定第二法RIDASCREEN®Chloramphenicol（编号：R1211）试剂盒检测说明书3原理黄曲霉毒素BlEIA微孔板含12个板条，每个板条8孔。用兔抗鼠抗体IgG包被。特异性抗体（鼠抗黄曲程毒素），黄曲霉毒素标记的酚（酶结合物）和黄曲霉毒素B1标准品或样品被加入到微孔后，特异性抗体被牢固地结合在板条上的兔抗鼠抗体IgG上，与此同时，游离的黄曲霉壽索（在标准溶液或样品中）和

2、酶结合物与特异性抗体竞争性结合。经过1小时孵育，在洗涤步骤屮除去非结合（酶标记）试剂。加入色原底物（四甲基联苯胺TMB）,结合的酶结合物可将无色的色原转化成为蓝色的产物。加入硫酸，终止底物反应，颜色由蓝变黄，在450mn波长下检测吸光度值，吸光度值与样品中黄曲霉毒素B1浓度成反比。4试剂4.1氯霉素试剂盒4.1.196孔板（12条X8孔）4.1.2氯霉素标准溶液4.1.3酚连接物4.1.4黄曲霉毒素抗体液4.1.5底物/发色剂4.1.6反应终止液4.1.7洗涤缓冲液4.2甲醇：分析纯5仪器5.1微孔板酶标仪。5.28道移液器:50〜300ulo5.3单

3、道移液器：50〜300ulo5.4连续单道移液器：5.5粉碎机。4.6液体混匀器。6分析步骤6.1样品提取5.1.1标准提収方法4.1.1.1大米和小米（脂肪含量〈3.0%）的提取试样粉碎后过20目筛，称取20.0g,加入250ml具塞锥形瓶中。准确加入60ml三氯甲烷，,盖塞后滴水封严。150r/min振荡30min。静置丿G用快速定性滤纸过滤于50ml烧杯中。立即取12ml滤液（相当4.0g试样）于75ml蒸发皿中，65°C水浴通风挥干。用2.0ml20%甲醇-PBS分三次（0.8ml,0.7ml,0.5ml）溶解并彻底冲洗蒸发皿中凝结物，移至小试

4、管，加盖振荡后静置待测。此液每毫升相当2.0试样。4.1.1.2玉米的提取（脂肪含量3.0%-5.0%）试样粉碎后过20目筛，称取20.0g,加入250ml具塞锥形瓶中。准确加入50.0ml甲醇-水（80+20）溶液和15.0ml石油瞇，盖塞后滴水封严。150r/min振荡30mino用快速定性滤纸过滤于125ml分液漏斗中。待分层后，放出下层甲醇-水溶液于50ml烧杯中，从中取10.0ml（相当于4.0g试样）于75ml蒸发皿中，以下按6.1.1.1自“65°C水浴通风挥干……”起依法操作。6.1.1.3花生的提取（脂肪含量15.0%-45.0%）试

5、样去壳去皮粉碎后称取20.0g,加入250ml具塞锥形瓶中。准确加入100.0ml甲醇-水（55+45）溶液和30.0ml石油僦，盖塞后滴水封严。150r/niin振荡30mino静置15min后用快速定性滤纸过滤于125ml分液漏斗中。待分层后，放出下层甲醇-水溶液于100ml烧杯中，从中取20.0ml（相当于4.0g试样）于另一125ml分液漏斗中，加入20.0ml三氯甲烷,振摇2min静置分层（如有乳化现象可滴加甲醇促使分层），放出三氯甲烷于75ml蒸发皿中，再滴加5.0ml三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取后，放出三氯甲烷于一并于蒸发皿中，以下按

6、6.1.1.1自“65°C水浴通风挥干……”起依法操作。6.1.1.4植物油的提取用小烧杯称取4.0g试样，用20.0ml石油艇移于125ml分液漏斗中，20.0ml甲醇-水（80+20）溶液分次洗烧杯，溶液一并移于分液漏斗中（精炼油4.0g样为4.525ml,直接用移液器加入分液漏斗，再加溶剂后振摇），振摇2min,静置分层后，放出下层甲醇-水溶液于75ml蒸发皿中，再用5.0ml甲醇-水溶液重复振摇提取一次，提取液一并加入蒸发皿中，以下按6.1.1.1自“65°C水浴通风挥干……”起依法操作。6.1.1.5麦类、面粉、薯干、豆类、花生酱等甲法：称取

7、20.0g粉碎后过筛试样（面粉、花生酱不需粉碎），置于250ml具塞锥形瓶中，加100.0m1甲醇-水（55+45）溶液和30.0ml石油醛或止已烷，盖塞后滴水封严。振摇30mino静置片刻，以又叠成折叠式的快速定性滤纸过滤于125ml分液漏斗中。待分层后，放出卞层甲醇-水溶液于另一-具塞锥形瓶中。从中取20.0ml甲醇-水溶液（相当于4.0g试样）置于另一125ml分液漏斗中，加入20.0ml三氯甲烷，振摇2min,静置分层（如有乳化现象可滴加甲醇促使分层）。放出三氯甲烷层，经盛有约10g预先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于50ml蒸发

8、皿中，再滴加5.0ml三氯甲烷于分液漏斗中重复振摇提取，三氯甲烷层于一并滤于蒸发皿中，最后用少