附录ⅩⅢC微生物限度检查法

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1、附录xmc微生物限度检查法微牛物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微牛物污染程度的方法。检查项口包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台而及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。供试品检查吋，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其冇效性及对微生物无毒性。除另冇规定外，本检查法中细菌及

2、控制菌培养温度为30°C〜35°C；霉菌、酵母菌培养温度为23°C〜28°C。检验结果以lg、lml>10g>10ml或10cnV为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。检验量检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）o除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm3贵重药甜、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂述不得少于4片一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最

3、小包装单位）的3倍量供试UN。供试品溶液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，冃温度不应超过45°Co供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。1•液体供试品取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠■蛋口腺缓冲液至100ml,混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试晶原液作为供试液。体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g,加PH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液至100ml,用匀浆仪或苴

4、他适宜的方法，混匀，作为I:10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。3•需用特殊方法制备供试液的供试品⑴非水溶性供试品方法1取供试品5g（或5ml）,加至含溶化的（温度不超过45°C）5g司盘80、3g单硬脂酸甘汕酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45°C的pH7.0无菌氯化钠■蛋HE东缓冲液至100ml,边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1：20的供试液。方法2取供试品10g,加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录XIIIB无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的

5、适宜容器中，必要吋可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45°C的pH7.0无菌氯化钠■蛋刚东缓冲液100ml,振摇5〜10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。（2）膜剂供试品取供试品100cn?,剪碎，加100ml的pH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液（必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1:10的供试液。（3）肠溶及结肠溶制剂供试品取供试品10g,加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml,置45°C水浴中，振摇，使溶解，作为1:10的供试液。（

6、4）气雾剂、喷雾剂供试品取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小吋，取岀，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释岀。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的pH7.0无菌氯化钠.蛋白豚缓冲液（若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80）屮，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1:10的供试液。（5）贴膏剂供试品取规定量供试品，去掉贴膏剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含冇表而活性剂（如聚山梨

7、酯80或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30分钟，制成供试液。贴膏剂也可以其他适宜的方法制备成供试液。（6）具抑菌活性的供试品当供试品有抑菌活性时，采用下列方法进行处理，以消除供试液的抑菌活性，再依法检查。常用的方法如下。①培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试甜含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数吋,取同稀释级的供试液2ml,每1ml供试液口J等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。每1ml供试液所注的平皿屮生长的菌数Z和即为lml的菌落数，计算每lml供试液的平均菌落数，按平皿法计数规则报

8、告菌数；控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。②离心