放射药理学_核技术在药学领域的应用

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1、核技术在药学研究中的应用Radionuclidetracingtechnique示踪实验:就是给观察对象(某种元素、化合物、细胞、甚至某种寄生虫等)加上“标记(Label)”，引入待研究系统(整体、离体细胞、无细胞系统等)，观察该“标记”的去向(部位、数量及时相过程)，亦即追踪该“标记”，以了解被标记物的运动转化规律(吸收、分布、排泄、转运、代谢等)。绝大多数示踪实验都用核素作标记，所以通常所说的示踪实验往往也就是指核素示踪实验。示踪实验中“标记”的作用：首先，很多研究对象是系统内原有的成分，它们通常处于动态平衡，含量及分布维

2、持稳态。必需另引入一定量的该种物质才能观察其运动转化规律。“标记”的另一作用是使观察的灵敏度和可靠性提高示踪技术生物学技术＋受体与配体基因技术细胞功能与代谢受体功能分布密度异常抗原表达基因异常表达显示报道基因代谢增高与减低细胞活性与凋亡免疫学技术受体显像受体放射分析放射免疫显像反义显像基因显像代谢显像凋亡显像NUCLEICACIDHYBRIDIZATIONASSAYS核酸杂交技术TypesofprobesDotblotSouthernBlotNorthernBlotInsituhybridizationChromosomein

3、situhybridizationMetaphaseorprotometaphasechromosomesareprobedwithlabeledDNA.TheDNAcanbelabeledwithafluorochrome(FISH).TissueinsituhybridizationSlicedorwholemountedpreparationscanbeprobedwithRNAprobestodetectmRNAexpressionColonyhybridization分子杂交技术在医学中的应用(一)遗传性疾病的诊断和

4、产前诊断：即基因诊断法(GeneDiagnosis)。1.用基因探针直接分析遗传病的基因缺陷：例如，限制酶MstⅡ识别顺序为CCTGAGG，正常血红蛋白的βA珠蛋白基因中包含这一顺序，经MstⅡ作用后产生1．15kb和0．2kb两个片段．镰状细胞贫血者因其谷氨酸密码子GAG突变为缬氨酸密码子GTG，失去这个MstⅡ限制酶切点，产生1.35kb的片段，据此可作诊断。分子杂交技术应用2．用基因探针间接分析与DNA多态紧密连锁的遗传病：在人类遗传物质中已经发现有800个区域，它们在各个体间DNA顺序是不相同的，因此经限制酶切割后会形

5、成不同长度的DNA。如果将DNA在凝胶中分离，用基因探针就会得到不同的片段模型，这种模型按孟德尔规律遗传，称为限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphisms简称RFLP)．若一多态区位于缺陷基因附近，很可能随缺陷基因一起遗传。所以分析DNA多态性可帮助诊断基因缺陷。(二)DNA指纹图谱在法医学上的应用：Wyman和White在人体DNA基因库中的随机片段里发现串联重复的小卫星区域。人类小卫星DNA中有一个10～16个碱基的常见“核心”顺序，用串联重复的核心顺序做成探针，对限制

6、酶消化后的人DNA作Southern印迹分析，可定出这些小卫星DNA的长度。该长度有高度多态性，表现在个体间有极高的特异性，就是在孪生子之间也能找到显著的差异，因而高度可变小卫星区域所得的限制性内切酶片段又称DNA指纹图谱。“指纹图”具有体细胞和生殖细胞系稳定性，法医甚至可用指纹图对血痕(相当于60ul血液)或精液斑(相当于5ul精液)作出分析，为法医学中的亲子鉴定和个人识别提供了极有用的手段。(四)致病微生物检测：不能分离培养或很难培养的致病微生物如淋球菌，巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、腺病毒、乙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和产生肠毒

7、素的大肠杆菌等，可通过分子杂交来鉴定。致病微生物杂交还可用于流行病调查。以HBV的DNA作探针与病人血清作打点杂交，可以随时了解病人体内乙型肝炎病毒是否仍在繁殖。如与肝组织杂交则可了解病毒基因是否整合。在AIDS病研究中的应用：应用组织切片原位杂交检测组织中是否存在AIDS病毒特有的HIV序列，可以确定感染细胞和组织的范围。原位杂交结合免疫细胞化学检测特异性细胞抗原，有助于进一步确定和显示HIV感染细胞的特性。MolecularImaging分子显像技术MolecularImagingTheuseofnon-invasivei

8、magingtechnologiesontheassaysofcellular/moleculareventsinlivingorganisms.Providebettermethodsforthestudyofbiologicalprocessesaswellasthedi