1.2基因工程的基本操作程序

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1、小结“分子手术刀”：限制酶“分子缝合针”：DNA连接酶“分子运输车”：载体基因工程基本工具来源作用结果分类作用最常用载体载体的条件其他载体1.以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键C练习2．在基因工程中用到的限制性核酸内切酶主要从原核生物中获得，一种限制酶只能识别双链DNA某种特定核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子，这与酶的什么性质相吻合

2、（）A．高效性B．具有多样性C．专一性D．催化活性受外界条件影响C练习3．作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由是（）A．能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B．具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D．能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选A练习目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序※目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定程

3、序步骤目的基因的获取一.目的基因的获取目的基因▲编码蛋白质的结构基因（主要）一些具有调控作用的因子（次要）上游下游原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构与RNA聚合酶结合位点能编码蛋白质不能编码蛋白质有调控遗传信息表达的核苷酸序列2.原核与真核的区别真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构外显子内含子能编码蛋白质的序列不能编码蛋白质的序列▲间隔,不连续练习：mRNA上的终止密码子不编码氨基酸，与之相对应的DNA片段位于()A．编码区下游的非编码区中B．基因编码区内C．基因的最末端D．基因编码区最末端的内含子中▲练习：从一个D

4、NA分子用限制酶切割获得一个目的基因有几个磷酸二酯键被水解？A．1B．2C．3D．4▲获取的方法基因库提取⑴从基因文库中获取3.目的基因的获取部分基因文库（cDNA文库）基因组文库（一种生物的所有基因）基因文库的构建mRNA杂交双链单链DNA双链DNA逆转录酶核酸酶HDNA聚合酶反转录法：基因组文库：CDNA文库：反转录法所有基因切成片断---两种文库的区别P10PCR反应原理图PCR反应原理变性退火(复性）延伸（2）PCR技术——体外复制特定DNA片段的核酸合成技术利用PCR技术扩增原理——前提——结果——过程——D

5、NA复制一段已知目的基因的核苷酸序列目的基因指数式增加PCR扩增仪变性退火(复性）延伸思考:PCR反应体系组成?模板,引物,DNA聚合酶,脱氧核苷酸▲▲PCR扩增过程练习①DNA变性(90℃-95℃)：双链DNA模板在热作用下，断裂，形成。②复性(55℃-60℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部。③延伸(70℃-75℃)：在酶的作用下，合成与模板链互补的_______。氢键单链DNA双链DNADNA链DNA聚合DNA复制与PCR的条件区别条件DNA复制PCR扩增模板原料酶DNA目的基因四种脱氧核苷酸解旋酶

6、DNA聚合酶DNA聚合酶能量引物需要需要需要需要四种三磷酸碱基脱氧核苷酸练习：下列获取目的基因的方法中不需要模板链的是（　　）（多选）Ａ．从基因文库中获取目的基因Ｂ．利用ＰＣＲ技术扩增目的基因Ｃ．反转录法获取目的基因Ｄ．通过ＤＮＡ合成仪利用化学方法人工合成目的基因▲▲氯基酸序列→mRNA序列→DNA序列→目的基因（3）直接合成法（基因较小）DNA合成仪基因表达载体的构建二.基因表达运载体的构建（核心）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代。2、载体的构建过程②用__________切割目的基因，使其产生。

7、①用一定的切割质粒，使其出现一个切口，产生_________。③将切下的目的基因片段插入质粒的_____处，再加入适量__________，形成了一个重组DNA分子(重组质粒)。限制酶黏性末端同种限制酶同种黏性末端切口DNA连接酶3、基因表达载体的组成目的基因启动子终止子标记基因载体的组成复制原点注意：1、终止子和终止密码的区别？2、目的基因可以与质粒整合的原因是什么？基因化学组成和结构是相同的终止密码在mRNA上练习：人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是（）A．提高受体细胞在自然

8、环境中的耐药B．有利于对目的基因是否导入进行检测C．增加质粒分子的分子量D．便于与外源基因连接▲转化——目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。受体细胞稳定表达三.将目的基因导入受体细胞导入植物细胞——（1）农杆菌的特点：（2）过程：(P12图)农杆菌转化法自然条件感染双子叶植物和裸子植