DNA重组技术的基本工具上课用

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1、专题一基因工程一、基因工程的概念按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的。因此又叫做DNA重组技术。基因工程依据的原理：基因重组注意：这里的基因重组是指将来自不同的DNA分子进行“拼接”，与有性生殖过程中的基因重组不同。别名操作环境操作对象操作水平实质结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平定向改变生物性状或获得基因产物基因重组设想一能否培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢？

2、基因工程培育抗虫棉的简要过程普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌（有抗虫毒蛋白）提取抗虫基因棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)重组DNA导入形成1.1DNA重组技术的基本工具三种基本工具手术刀针线运输车在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？二、“分子手术刀”--限制性核酸内切酶（限制酶）1.来源主要是从原核生物中分离2.作用识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（特异性）EcoRⅠEcoRⅠ限制酶识别：GAATTC序列3.结

3、果：形成黏性末端限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA两条单链切开，这样的切口叫黏性末端。SmaⅠSmaⅠ限制酶识别：GGGCCC序列3.结果：形成平末端限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，这样的切口叫平末端。催化形成的是磷酸二酯键，而不是氢键。GCTTAAAATTCG磷酸二酯键磷酸二酯键二、“分子缝合针”—DNA连接酶1.作用：将双链DNA片段连接，成为一个完整的DNA分子。2.种类(1)E.coliDNA连接酶：(大肠杆菌)只能连接黏性末端(2)T4DNA连接酶：（T4噬菌体）既可以连接黏性末端，又连接平末端，但连接平末端效率低

4、。小结：限制性核酸内切酶与DNA连接酶作用位点相同，作用结果相反。DNA连接酶与DNA聚合酶作用有何不同？寻根问底AGTACTAATDNA母链DNA聚合酶DNA聚合酶TTAGATATCCGACGGTTTAA……………………………………………………DNA连接酶寻根问底思考不同点：DNA连接酶是将___________连接起来,模板DNA聚合酶是将___________连接起来，模板都催化磷酸二酯键的形成两个DNA片段单个核苷酸共同点：不需要需要四、分子运输车——基因进入受体细胞的载体1.载体的种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒最

5、常用的载体质粒拟核大肠杆菌细胞一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，能自我复制的小型环状双链DNA分子。2.载体的条件：假如质粒没有限制酶切割位点将怎样？（没有限制酶能识别的序列）质粒限制酶？限制酶？限制酶？限制酶？目的基因A.有一至多个限制酶切割位点，便于目的基因插入目的基因插入位点重组DNA受体细胞受体细胞假如质粒含有标记基因如：四环素抗性基因含四环素的培养基B.具有标记基因,便于重组DNA的鉴定和筛选2.载体的条件：A.有一至多个限制酶切割位点，便于目的基因插入受体细胞C.在受体细胞中能自我复制或整合到受体染色体DN

6、A上随染色体DNA进行同步复制B.具有特殊的标记基因,便于重组DNA的鉴定和筛选2.载体的条件：A.有一至多个限制酶切割位点，便于目的基因插入D.对受体细胞无害质粒的模式图质粒DNA大肠杆菌细胞目的基因插入位点氨苄青霉素抗性基因复制原点思考：如果受体细胞分别是动物细胞和细菌，所用的载体相同吗?不相同，动物细胞是真核细胞，一般用动物病毒做载体；细菌是原核生物，一般用质粒做载体。