细胞培养及其应用

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1、第六章口腔细胞培养及其应用口腔医学院王青山第一节细胞培养一、细胞培养的基本原理第六章口腔细胞培养及其应用第一节细胞培养一、细胞培养的基本原理★★（一）概念细胞培养：模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组织细胞在体外环境存活、生长增殖，并维持其结构功能。第六章口腔细胞培养及其应用（二）体外细胞生物学1、形态特点（1）贴壁型细胞必须贴附于支持物表面才能生长。大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞。有形态上表现单一化现象，呈返祖现象。第六章口腔细胞培养及其应用按照培养细胞的主要形态，可分为几大类

2、型成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状、火焰状、漩涡状。凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌细胞等常呈本型状态。第六章口腔细胞培养及其应用上皮型细胞细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动，起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。第六章口腔细胞培养及其应用游走细胞型：在支持物上呈散在生长，一般

3、不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。多形细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，统归于此类。第六章口腔细胞培养及其应用（2）悬浮型细胞悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于某些癌细胞和血液淋巴细胞生长良好细胞圆形，单个或小细胞团；生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)；易于收获，可获得稳定状态；观察不方便第六章口腔细胞培养及其应用2、生长增殖过程（1）组织培养细胞生命期指细胞在培养中持续增殖和生长的时间三个阶

4、段第六章口腔细胞培养及其应用原代培养期：初代培养，从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，持续1~4周。细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似，是检测药物很好的实验对象。细胞群异质，即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强，独立生存性差。细胞多呈二倍体核型。第六章口腔细胞培养及其应用传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。持续时间最长，细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。反复传代

5、有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。第六章口腔细胞培养及其应用衰退期：增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。少数情况下，在三期任何一点，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性（不死性）或恶性性。不死性即细胞获持久性增殖能力，称无限细胞系（连续细胞系）。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。第六章口腔细胞培养及其应用（2）培

6、养细胞一代生存期细胞“一代”系指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，它与细胞倍增一代非同一含义。如某一细胞系为第n代细胞，指该细胞系已传代n次。在细胞一代中，细胞能倍增3～6次。细胞传一代后，一般要经过潜伏期（游离期，贴壁期）、指数生长期、停止期（平台期）第六章口腔细胞培养及其应用潜伏期：细胞接种培养后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。此时细胞胞质回缩，胞体呈圆球形。接着细胞附着或贴附于底物表面，称贴壁，悬浮期结束。细胞无增值，少见分裂相。第六章口腔细胞培养及其应用初代培养细胞贴附慢，可达10～

7、24小时或更多；连续细胞系和恶性细胞系快，10～30分钟即可贴附。贴附现象是一个复杂和与多种因素相关的过程。支持物能影响细胞的贴附；底物表面不洁不利贴附；底物表面带阳性电荷利于贴附；一些特殊物质如纤维连接素、细胞表面蛋白等也参与贴附过程。第六章口腔细胞培养及其应用初代培养细胞潜伏期长，约24～96小时或更长，连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅6～24小时；细胞接种密度大时潜伏期短。当细胞分裂相开始出现并逐渐增多时，标志细胞已进入指数增生期。第六章口腔细胞培养及其应用指数增生期：细胞增值最旺盛阶段，细胞分裂

8、相增多。分裂相数量可作为判定细胞生长旺盛与否的重要标志。以细胞分裂指数表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。一般细胞分裂指数0.1%～0.5%，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数高达3%～5%。第六章口腔细胞培养及其应用特点：是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段；培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一；是理想的实验用细胞指数增生期持续3～5天后，随细胞数量不断增多、生长空间渐趋减少、最后细胞