1[1].1DNA重组技术的基本工具

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1、生物选修3现代生物科技专题专题1基因工程1.1DNA重组技术的基本工具基因工程的概念是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组技术和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的生物类型和生物产品，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫DNA重组技术；也叫基因拼接技术。掌握基因工程的概念应该注意以下几个方面操作环境：生物体外操作对象：基因操作水平：DNA分子水平基本原理：基因重组结果：人类需要的基因产物转基因抗虫棉抗虫害的玉米转鱼抗寒基因的番茄转基因鲑鱼基因工程与传统的变异方式相比具有什么特点

2、？打破了物种界限，实现了物种间遗传物质的重组。变异是定向的要实现药物蛋白基因在烟草中的表达，提前要做哪些关键工作？烟草的DNA药物蛋白基因思考DNA重组技术的基本工具“分子手术刀”—“分子缝合针”—“分子运输车”—限制性核酸内切酶DNA连接酶载体1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”⑴来源：主要来源于微生物(尤其是原核生物）⑵种类：约有4000种⑶作用：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(6个,4、5、8个)——特异性⑷结果：形成两种末端黏性末端平末端PGPTPCPAPC

3、PAPGPT限制性内切酶的作用部位磷酸二酯键EcoRI只能识别GAATTC的核苷酸序列只从G和A之间切开;SmaI只识别CCCGGG的核苷酸序列,只从C和G之间切开,画出切割后的结果.当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。2、DNA连接酶——“分子缝合针”PGPTPCPAPCPAPGPT磷酸二酯键(1)种类：(2)作用部位：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键（黏性末端）（黏性末端和平末端）效率高DNA聚合酶与DNA连接酶相同区别DNA聚合酶DNA连

4、接酶在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来将两个DNA片段连接起来；将DNA双链上的两个缺口同时连接起来形成磷酸二酯键见《步步高》P.203——深化拓展1表的复制DNA3、载体——“分子的运输车”⑴作用：把目的基因送入受体细胞中去⑵常用的载体：细菌细胞质的质粒λ噬菌体的衍生物动植物病毒最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。质粒的存在与否对受体细胞生存没有决定性作用，但复制只能在受体细胞内完成。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子。质粒是基因工程最常用的

5、载体。⑶作为载体必须具备的条件:假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？如果载体对受体细胞有害将怎样？作为载体必须具备的条件能够在受体细胞中稳定保存并大量复制。有一个至多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。有特殊的遗传标记基因，便于进行筛选。必需是安全的，不会对受体细胞有害。注意：真正用作载体的质粒都是人工改造过的。