1、1DNA重组技术的基本工具 Microsoft PowerPoint 演示文稿

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1、1、1DNA重组技术的基本工具基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。基因工程的概念基因工程的“”指“限制性核酸内切酶——分子手术刀”“”GAATTCCTTAAGCTTAAGAATTCGTGCAACGTACGTGCAT不同的限切酶所形成的黏性末端不同BACKDNA外源基因GCATTGCAACGTCGTAGCATTGCA1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是

2、从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，一种限切酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。基因工程的“”指“DNA连接酶——分子缝合针”“”作用：连接“梯子”断口的“扶手”而非“梯子”中间的“踏板”CTTAAGAATTCGBACK如何理解图1—4？2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的

3、比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于T4噬菌体大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。基因工程的“”目的基因指某些小型DNA分子“”条件：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存具有多个限制酶切点（每种限制酶切点最好只有一个），以便与外源基因连接具有标记基因，便于进行筛选基因进

4、入受体细胞的载体——“分子运输车”TGCAACGTACGTGCATACGTGCAG标记基因ACGTGCAT外源基因ACGTGCAT重组DNA四环素正常生活不能正常生活四环素BACK抗四环素基因抗青霉素基因受体细菌重组DNA提取人的胰岛素基因(用“鸟枪法”)，能行吗？抗四环素基因大肠杆菌的质粒该受体菌能产生胰岛素吗?不能!因为真核生物的基因编码区中有内含子，到了原核细胞中的真核基因在表达时是不能完成自动剪切的。通常采用的是人工合成法，如成熟的mRNA逆转录法、人工合成DNA法均可，这样合成的基因编码区内是没有内含子的。原核生物也没有内质网和高尔基体。目的基

5、因获取与基因结构3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行人工改造的。