DNA重组技术的基本工具1

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1、1DNA重组技术的基本工具第1节又称基因拼接技术,或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物经新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程(geneengineering)让禾本科植物也能固氮？设想根瘤菌的固氮作用培育转基因大肠杆菌的简要过程：你认为上述培育转基因大肠杆菌的关键步骤有哪些？普通大肠杆菌(不能分泌胰岛素)人体组织细胞提取胰岛素基因与运载体DNA拼接导入大肠杆菌(含胰岛素基因)转基因大肠杆菌(能分泌胰岛素)实例展示“基因工程

2、”的理解操作环境：操作水平：原理：本质：优点：基因工程得以实现的理论基础：体外环境分子水平基因重组甲（供体：提供目的基因）乙（受体：表达目的基因），即基因未变，只是基因表达场所的转移。与杂交育种相比，克服了远缘杂交不亲和的障碍。与诱变育种相比，定向改变生物的遗传特性。导入DNA是遗传物质的证明；DNA双螺旋结构和中心法则的确立；所有生物共用一套遗传密码子。问题探讨手术刀缝合针运输工具培育抗虫棉需要哪些基本工具?来源种类作用作用结果阅读课本4-5页“限制性核酸内切酶——分子手术刀”的相关内容，填写下表自主学习主要从原核生物中分离纯化

3、而来已经分离出大约4000种1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。形成两种末端：黏性末端或平末端特异性1’2’3’4’5’脱氧核苷酸的结构G1’2’3’4’5’1’2’3’4’5’A3’,5’-磷酸二酯键3’端5’端3’端5’端磷酸二酯键10仔细观察各限制酶识别的特定序列有何特点？限制酶的识别序列限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列中轴线在G与A

4、之间切割大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。EcoRI限制酶的作用黏性末端黏性末端EcoRI限制酶的切割被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。中轴线SmaI限制酶的作用在G与C之间切割平末端　　　平末端SmaI限制酶的切割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？原核生物易

5、受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。寻根问底为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DN

6、A被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。16类型来源功能相同点差别E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表自主学习把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键DNA连接酶的作用两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来DNA连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！

7、DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低DNA连接酶的缝合作用DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质化学本质不同点都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质DNA连接酶与DNA聚合酶的比较(1)只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键（1）在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键（2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链（2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶

8、Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。（1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。（2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。（3）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限