第一章分光光度技术

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1、参考书：1.李元宗,常文保编著.《生化分析》,高等教育出版社，20032.杨安钢，毛积芳，药力波等编.《生物化学与分子生物学实验技术》，高等教育出版社，20013.汪尔康,陈义编著.《生命分析化学》,科学出版社，2006考试：读书报告80%,平时（提问与翻译）20%授课人：罗云敬单位：北京工业大学生命科学院生化分析第一章分光光度技术的应用概论溶液中物质含量的测定用紫外光谱鉴定化合物溶液对光线有选择吸收作用，由于分子结构的不同，对不同波长光的吸收能力就不同，因此每种物质都有其特定的吸收光谱。分光光度技术就是依据Lambe

2、rt-Beer定律，利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术。第一章分光光度技术的应用概论返回Lambert-Beer定律吸光度:为透光度倒数的对数，用A表示，即A=lg(1/T)=lgI0/It透光度：透光度为透过光的强度It与入射光强度I0之比，用T表示：即T=It/I01.吸光度和透光度2.朗伯定律和比尔定律Lambert-Beer定律朗伯定律：当溶液浓度不变时，吸光度与溶液液层的厚度成正比，即A=K1L式中K1为比例系数，其值取决于入射光的波长，溶液的性质、浓度及温度；L为液层的厚度。比尔定律：当溶液的

3、厚度不变时，吸光度与溶液的浓度成正比，即A=K2C式中K1为比例系数，其值取决于入射光的波长，溶液的性质、浓度及温度；C为液层的厚度。朗伯-比尔定律：就朗伯定律和比尔定律的合并，当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A=KCL式中比例常数K与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。C为吸光物质浓度，L为透光液层厚度。Lambert-Beer定律Lambert-Beer定律3．朗伯-比尔定律：朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。Lambert-Bee

4、r定律Lambert-Beer定律4.吸光系数当L以cm，c以g/L为单位，上式的比例系数K称为吸光系数单位为L/(g.cm)当L以cm，c以mol/L为单位，K称为摩尔吸光系数，用ε表示。ε的单位为L/mol.cm，它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。5.摩尔吸光系数返回一.溶液中物质含量的测定用此法需要测定标准溶液（浓度Cs已知的溶液）和未知溶液（浓度Cx待测的溶液）的吸光度，两者进行比较而得知Cx=AxCs/As第一章分光光度技术的应用式中As、Ax分别为标准溶液和未知溶液的吸光度。

5、标准曲线法利用摩尔吸光率法C=A/ε注：含量测定时所用波长为被测物质的最大吸收波长第一章分光光度技术的应用一.溶液中物质含量的测定返回二.用紫外光谱鉴定化合物各种物质都有其特定的吸收光谱曲线，可以通过绘制吸光光谱图来鉴别用不同波长的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对各单色光的吸光度，绘制一波长为横坐标、吸光度为纵坐标的曲线即吸收光谱曲线但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同第一章分光光度技术的应用第一章分光光度技术的应用Abs日立U-3010Spectrometer第一章分光光度技术的应用结束蛋白质构象变化

6、研究