《分光光度》PPT课件

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1、第7章吸光光度法7.1概述7.2吸光光度法基本原理7.3分析方法和仪器7.4显色反应及影响因素7.5光度分析法的设计7.6吸光光度法的误差7.7吸光光度法的应用吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法，属于分子吸收光谱分析方法基于外层电子跃迁7.1概述吸收光谱发射光谱散射光谱分子光谱原子光谱7.2吸光光度法基本原理一、吸收光谱产生的原因光谱名称波长范围X射线0.1~10nm远紫外光10~200nm近紫外光200~400nm可见光400~750nm近红外光0.75~2.5um中红外光2.5~5.0um远红外光5.0~1000um微波0.1~100cm无线电波1～1000m当光子的能

2、量与分子的E匹配时，就会吸收光子E=hu=hc/l光:一种电磁波,波粒二象性单色光：具有相同能量(相同波长)的光.混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起。/nm颜色互补光400～450紫黄绿450～480蓝黄480～490绿蓝橙490～500蓝绿红500～560绿红紫560～580黄绿紫580～610黄蓝610～650橙绿蓝650～760红蓝绿二、物质颜色和其吸收光关系例如：CuSO4溶液5吸收黄光透过蓝光白光→人眼CuSO4实验证明：CuSO4溶液浓度越高，对黄色光的吸收越多，表现为透过的蓝色越强，溶液的蓝色也越深。吸收光谱曲线：物质在不同波长下吸收光的强度大小A～l关系

3、最大吸收波长lmax：光吸收最大处的波长三、一些基本名词和概念lmax对比度(Δl):络合物最大吸收波长(lMRmax)与试剂最大吸收波(lRmax)之差ΔlCr2O72-、MnO4-的吸收光谱300400500600700/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2Absorbance350原子光谱为线光谱分子光谱为带光谱电子跃迁能级分子振动能级分子转动能级不同物质吸收光谱的形状以及max不同——定性分析的基础同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax不同——定量分析的基础9四、朗伯-比尔定律I0=Ir+It+IaI0=It+IaI0IrI

4、tIaT=It/I0,T:透射比或透光度A=lg(I0/It)＝lg(1/T),A:吸光度朗伯定律:(1760)A=lg(I0/It)=k1b当入射光的,吸光物质的c一定时,溶液的吸光度A与液层厚度b成正比.比尔定律(1852)A=lg(I0/It)=k2c当入射光的,液层厚度b一定时,溶液的吸光度A与吸光物质的c成正比.当一束平行单色光垂直照射到样品溶液时，溶液的吸光度与溶液中吸光质点的浓度及光程（溶液的厚度）成正比关系－－－朗伯比尔定律－－－光吸收定律数学表达：A＝lg(1/T)=Kbc其中，A:吸光度，T:透射比，K:比例常数，b:溶液厚度，c:溶液浓度注意：平行单色光均相介质

5、无发射、散射或光化学反应稀溶液吸光度A、透射比T与浓度c的关系13AT(%)cA=kbc1.00.80.60.40.210080604020灵敏度表示方法摩尔吸光系数eA=ebcA=Kbcc:mol/Lε表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时溶液的吸光度。单位：(L•mol-1•cm-1)c:g/LA=abca:吸光系数溶液浓度的测定A＝bc工作曲线法(校准曲线)朗伯-比尔定律的分析应用01.02.03.04.0c(mg/mL)A。。。。*0.800.600.400.200.00Axcx标准比较法：As=bcs（标准样品)Ax=bcx（待测样品)注意:用比较法测定时，所用

6、标准溶液浓度应与待测溶液的浓度相接近，且实验条件应相同。16五、吸光度的加和性与吸光度的测量17A=A1+A2+…+An用参比溶液调T=100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。方便、灵敏，但准确度差，常用于限界分析。187.3分析方法和仪器一、目视比色法观察方向空白c1c2c3c4二、光电比色法光电比色计结构示意图通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)滤光片吸收滤光片：只允许指定的窄范围波长光通过，其他波长的光均被吸收。选择滤光片的原则：滤光片透光率最大的光是溶液吸收最大的光,即滤光片的颜色与有色溶液的颜色互补。三、分光光度法和分光

7、光度计21通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光，波长可调,故选择性好,准确度高。光源单色器样品池检测器读出系统1.分光光度计的基本原件常用光源光源波长范围(nm)适用于氢灯185~375紫外氘灯185~400紫外钨灯320~2500可见，近红外卤钨灯250~2000紫外，可见，近红外氙灯180~1000紫外、可见（荧光）能斯特灯1000~3500红外空心阴极灯特有原子光谱激光光源特有各种谱学手段氙灯氢灯钨灯单色器作用:产生单色光常用的