Kernel 呋喃它酮代谢物说明书(2014-1-7)

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1、广州市瑞品生物技术有限公司Kernel™呋喃它酮代谢物酶联免疫反应试剂盒说明书(货号：EVAMOZ-01)1．概述Kernel™呋喃它酮代谢物酶联免疫反应测试盒是用于检测饲料、鱼、虾、肉类组织（牛肉、鸡肉和猪肉）、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿液中呋喃它酮代谢物的残留量。该试剂盒特点包括：Ø快速(4小时)，高回收率(80-95%)，多种样品的低成本提取方法。Ø高灵敏度（0.025ng/g或者0.025ppb），低检测下限（0.05ng/g）。Ø检测过程只需要不到1小时。Ø高重复性。2．试剂盒原理Kernel™呋喃它酮代谢物酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有呋喃它

2、酮代谢物的药物抗原已经包被于微孔板上，在分析时，样品中药物特异性地与抗体相结合。如果药品中有药物存在，它将阻止包被于微孔板上的药物与抗体结合。当与样品药物相结合的药物抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，与经酶标记物相结合。反应后颜色深度与样品中呋喃它酮代谢物的含量成反比。3.试剂盒组成部分和储存内容物规格保存呋喃它酮代谢物包被板96孔板（12×8孔）2-8℃呋喃它酮代谢物标准品：0ng/ml阴性质控0.025ng/mL0.1ng/mL0.4ng/mL0.8mL0.8mL0.8mL0.8mL0.8mL2-8℃1.6ng/mL6.4ng/mL0.8mL回收用1

3、0ng/ml0.8mL2-8℃1×HRP酶结合物6mL2-8℃10×浓缩洗液(WashSolution)50mL2-8℃7地址：广州市海珠区新港东路致远街32号电话：020-898837868923703834094537传真：020-89883786广州市瑞品生物技术有限公司终止液(StopBuffer)12mL2-8℃TMB底物(TMBSubstrate)12mL2-8℃10×样品提取液(ExtractionBuffer)50ml2-8℃5mM2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)12ml2-8℃4.样品检测下限样品检测下限虾/鱼/肉0.05饲料0

4、.1鸡蛋/蛋粉0.05蜂蜜0.05牛奶0.05血清0.05尿液0.055.交叉反应硝基呋喃类交叉反应(%)呋喃它酮AMOZ100呋喃唑酮AOZ<0.04呋喃妥因AHD<0.06呋喃西林SEM<0.056．未提供的设备或材料1)酶标仪(450nm)2)匀质器3)漩涡振荡器4)微量加样器(10、20、100和1000mL各一支)5)多道枪：50-300mL6)乙酸乙酯7)正己烷(或正庚烷)7地址：广州市海珠区新港东路致远街32号电话：020-898837868923703834094537传真：020-89883786广州市瑞品生物技术有限公司1)1MNaOH2)1MHCL

5、7.注意事项实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。1)标准品中含有呋喃它酮代谢物，请小心使用。2)不要使用过期的试剂盒。3)不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保酶结合物及酶结合物稀释液正确配制。4)尽量保持室温（22.5±2.5）°C，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。5)水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。6)加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。7)孵育时间的计算越规范越好，保持

6、添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。8)从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。9)将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。8．样品的制备样品保存在2-4℃不超过1-2天，如果需要保存较长的时间，应该放置-20℃。样品使用前应恢复到室温。1×样品缓冲液按1：9的比例配制10×浓缩样品缓冲液和双蒸馏水，举例：取1ml的10×浓缩样品缓冲液加入到9ml双蒸馏水中，配制成10ml的1×样品缓冲液，按需要，可同比例放大或缩小。1M盐酸溶液举例：取8.3ml的36%盐酸溶液定容到100ml的双蒸馏水中。按需要，可同比例放大或缩小。1M氢氧化钠溶液举

7、例：称取4g的氢氧化钠粉末溶解到100ml的双蒸馏水中。按需要，可同比例放大或缩小。鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）Ⅰ衍生反应（1）称取1g匀质样品，加入4mL蒸馏水，0.5mL1MHCl和200µL衍生化试剂2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；（2）37°C恒温培养16小时，静置过夜，或者60°C恒温培养3小时。Ⅱ提取步骤（1）加入5mL的1×缓冲液，0.4ml的1M的NaOH，6ml乙酸乙酯，涡旋振荡1分钟；（2）室温（22.5±2.5）°C下离心力4000g离心10分钟；（3）取3mL上清液(相当于0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及