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1、第22卷,第3期徐州师范大学学报(自然科学版)Vol22,No.32004年9月J.ofXuzhouNormalUniv.(NaturalScienceEdition)Sep.,2004大豆中异黄酮提取条件及其在提取液中的存在形式122袁龙,王晓磊,刘建周(1.徐州医药高等职业学校,江苏徐州221116;2.中国矿业大学化工学院,江苏徐州221008)摘要:以大豆豆粕为原料,以总异黄酮为目标产物,采用正交试验设计探讨了用乙醇-水体系作溶剂提取大豆异黄酮的最佳条件,即体积分数为70%的乙醇,m乙醇V水=0.1g
2、/ml,50下提取3次,每次回流时间10h.采用酸水解法和等电点沉淀法研究了异黄酮在提取液中的存在形式,即水不溶性异黄酮占80%,水溶性异黄酮占920%,其中与糖结合的占613%,与蛋白质结合的占307%,为进一步分离异黄酮提供了试验基础.采用HPLC法测定异黄酮的量.关键词:异黄酮;提取;豆粕;高效液相色谱法中图分类号:R1513文献标识码:A文章编号:10076573(2004)03005504大豆异黄酮(soybeanisoflavones,ISO)是大豆生长过程中形成的一类次生代谢
3、产物.生物学研究表明,异黄酮具有一定的雌激素功能和突出的抗氧化活性,不仅对人体生理代谢起着有益的调节作用,而[1]且在预防癌症、骨质疏松症和心血管疾病等方面有其特殊的功效,具有开发成新型药物的潜在价[2]值.异黄酮是一类生物类黄酮,主要是指以3苯并呋喃酮为母核的化合物.目前发现大豆中的异黄酮共有12种,分为游离型的苷元(Aglycone)(占总质量的2%~3%)和结合型的糖苷(Gluconside)(占总质量[3]的97%~98%)两类,后者经酸水解或葡萄糖苷酶催化分解能转化为游离型的苷元而发挥生理活[2]性作用
4、.游离型异黄酮的化学结构式为:HOO染料木因:R1=OH,R2=H黄豆苷原:R1=H,R2=HR2黄豆黄素:R1=H,R2=OCH3R1OOH结合型异黄酮分子结构式为:CH2OR5OOO染料木苷:R3=OH,R4=H,R5=OH黄豆苷原:R3=H,R4=H,R5=H黄豆黄素:R3=H,R4=OCH3,R5=HHOOHR4OHR3O6氧乙酰染料木苷:R3=OH,R4=H,R5=OHOH6氧乙酰黄豆苷原:R3=H,R4=H,R5=COCH36氧乙酰黄豆黄素:R3=H,R4=OCH3,R5=C
5、OCH36氧丙二酰染料木苷:R3=OH,R4=H,R5=COCH2COOH6氧丙二酰黄豆苷原:R3=H,R4=H,R5=COCH2COOH6氧丙二酰黄豆黄素:R3=H,R4=OCH3,R5=COCH2COOH我国大豆资源丰富,为异黄酮的开发利用提供了自然条件;但是由于异黄酮在大豆中的含量相对很低(01%~05%),且绝大多数与蛋白质和碳水化合物结合呈糖苷态,使异黄酮的提取和分离比较困难.本文以总异黄酮为目标产物,以大豆经榨油后的豆粕为原料,研究异黄酮的提取条件及其在提取液中的存在形式,为提取和分离
6、异黄酮提供试验基础.收稿日期:20040312作者简介:袁龙(1968-),男,江苏沛县人,讲师,主管药师,主要从事药物分析的研究.56徐州师范大学学报(自然科学版)第22卷1材料与方法11材料大豆豆粕,徐州市丰裕科技饲料有限公司;染料木素和大豆黄素对照品,中国药品生物制品鉴定所;化学试剂均为分析纯.12仪器ShimadzuLC10A型高效液相色谱仪(日本岛津);旋转蒸发器(RE52,上海亚荣生化仪器厂);800型离心沉淀器(4000r/min);Orion828型pH测试仪等.13异黄酮的提
7、取将200g干燥豆粕装入1000ml三口烧瓶,以体积分数为50%~90%的乙醇水溶液为溶剂,在索氏提取器中30~70下重复提取3次,每次溶剂用量为浸没豆粕即可,每次提取时间10~30h.提取液过滤,合并混匀.在旋转蒸发器上真空浓缩成膏状物.14分析方法对照品溶液的配制用电子天平准确称量50mg染料木素和35mg大豆黄素对照品,用甲醇溶解后,用蒸馏水定容于同一50ml容量瓶中.样品预处理HPLC进样前需对大豆异黄酮样品进行预处理.准确称量1000mg待分析样品于100ml圆底烧瓶中,加入20ml甲醇和5
8、ml质量分数为25%的HCl水溶液,加热回流20h,使大豆异黄酮糖苷完全水解为大豆异黄酮苷元.水解液用甲醇定容于50ml容量瓶中.[4]蛋白质含量(N!625)测定凯氏定氮法.[5]碳水化合物含量测定费林氏定容法(以转化糖计).[5]脂肪含量测定索氏抽提法.15色谱条件色谱柱,HypersilODS2(ID:150m
