课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (3)

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1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案(贠宏伟)【学习目标】1、研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。【重点难点】重点：能利用选择培养基分离细菌难点：运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。【自主学习】一、研究思路1．1筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作

2、选择培养基。1.2统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。1.3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。二、实验设计2．1实验设计的内容包括实验

3、方案、、实施步骤和等。2．2实验流程：配制土壤溶液----系列稀释---涂布平板与培养---菌落计数2．3土壤微生物主要分布在距地表的近中性土壤中，约为细菌。2．4分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同不同，其目的是保证获得菌落数在之间、适于计数的平板。细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。2．5培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养d，霉菌一般在℃的温度下培养d。2．6在菌落计数时，每隔h统计一次菌落数目。选取菌落数目时的记录作为结果，以防止因培养

4、而导致遗漏菌落的数目。2．7菌落的特征包括等方面。2．9实验过程41）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要2）应在火焰旁称取土壤g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的中，塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在旁进行。4）实验时要对培养皿作好标记。注明、培养时间、稀释度、等。3．结果分析与评价3．1　对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助化学的方法。3．2　在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。氨会使培养基的碱性，PH。因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。3

5、．3　在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变，说明该细菌能够。（三）课堂总结、点评实验方案土壤中尿素分解菌的分离与计数分离筛选微生物的原理有利于目的菌株生长抑制或阻止其他微生物生长人为条件微生物计数方法与原理稀释涂布平板法显微镜直接计数对照设置与重复设置实验设计实验操作结果与分析【【师生互动、问题探讨】1.土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？2.如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？2.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？3.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中

6、能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？2013-2-39.临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。4（1）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。（2）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将

7、分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。（3）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。2014-2-39．为了调查某河流的水质状况

8、，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样