菌种管理规定

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1、1•目的：制定微牛物检验用菌种管理规定，规范药品微牛物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微牛物学检验结果的准确可靠。2.依据：ChP2010版(二部)、《中国药品检验标准操作规范》(2010年版)。3.范围：木规程适用于公司QC检定用菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。4.责任：4.1微牛物检验人员负责菌种的中购、接收、保存、分发并记录。4.2微牛物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁并记录。5.相关文件及术语：5.1术语5.1.1标准菌种：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可

2、追溯的菌株。如中国药品牛物制品检定所医学微牛物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签CMCC(B)代表细菌(bacteria),CMCC(F)代表真菌(fungi)每种菌具有固定的代号。5.1.2标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。5丄3传代菌种：用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。5丄4工作用菌种：用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。5.1.5菌种的代：指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代

3、。5.2注意事项：微牛物检验用检定菌种系指从指定机构采购的标准储备菌株。标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株，工作菌株不可替代标准菌株；商业派牛菌株仅可用作工作菌株，标准储备菌株经继代培养获得工作菌株。标准储备菌株解冻后，最好不要重新冷冻和再次使用。6流程:6.1检定菌的申购需由微牛物检验员填写采购申请单并经品管课课长复核，质管部经理审核批准后，由微牛物检验员向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。6.2检定菌的接收

4、菌种到达实验室后，由微生物检验人员接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：名称及编号、数量、代数、来源、有效期、接收日期、接收人、保存条件等，并将其暂贮存于菌种使用说明书所载的条件下，在说明书规定时间内必须完成转种。6.3检定菌的保存6.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌牛长充分以后，转移至2〜8°C冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，均应灭活处理后销毁

5、。保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；霉菌及芽孑包：3个月。6.3.2传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。6.321甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度20%）,即为10%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，在・86°C冷冻条件下保存。此甘油冷冻管为第2代（G2）。可以每隔2年转种一代。使用时，取出一支放至室温，转

6、种增菌培养或接种至琼脂斜面复苏，挑取纯菌落传代或工作用。此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏（存）（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌）。63.2.2液体石蜡保存法6.3.2.2.1无菌液体石蜡的制备：选用优质化学纯液体石蜡，将液体石蜡分装加塞，用牛皮纸包好，在121°C灭菌30分钟,经无菌检查后备用。63.2.2.2液体石蜡管的制备：将菌种穿刺接种于半固体高层培养基中，在适宜条件下培养结束后，在层流台下用无菌吸管吸取上述无菌液体石蜡至培养好的菌种管内，并使石蜡高出菌种表面约lcm使菌体与空气隔绝，并将试管貫立，置于・20°C冷冻或2〜8°C冰箱

7、中保存。此法主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽孑包杆菌的保存（如枯草芽孑包杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）。6.3.3传代用菌种的保存方法、条件及期限，见《传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限》（附件1）。6.4检定菌的传代检定菌菌种的传代因冻干菌（标准菌种）与传代用菌种的区别而不完全相同。641标准菌种的复苏、确认、传代6.4.1.1标准菌种的复苏6.4.1.1.1把冻干菌种管、银子、营养肉汤培养基（或其它适宜培养基）数支，移入接种室或超净工作台。6.4.1.1.2将冻干菌种管外壁用消毒剂消毒，用75%乙醇棉擦净，放在超净工作台上。点燃酒精灯

8、，将标准菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基（或其它适宜的培养基），滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。6.4.1.1