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1、甘油单油酸酯液晶载体材料体外毒性探究［摘要］目的：评价立方液晶载体材料甘油单油酸酯(glycerolmonoolein,GMO)的细胞毒性。方法：体外培养大鼠皮肤成纤维细胞，以MTT法及琼脂覆盖法评价立方液晶对大鼠皮肤成纤维细胞的细胞毒性分级情况。结果：甘油单油酸酯对大鼠皮肤成纤维细胞的细胞活力无明显影响，毒性分级为0级。结论：甘油单油酸酯无潜在的细胞毒性，是一种生物相容性良好的载体材料。［关键词］立方液晶；甘油单油酸酯；细胞毒性［中图分类号］R329.2+8［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2010)04(
2、a)-022-03InvitrocytotoxicstudyonliquidcrystallinematerialofglycerolmonooleinZHOUYanfangl,PENGXinsheng2仃.DepartmentofPathophysiology,GuangdongMedicalCollege,Dongguan523808,China；2.DepartmentofPharmacy,GuangdongMedicalCollege,Dongguan523808,China)[Abstract]0bjective
3、：Toevaluatethecytotoxicityofglycerolmonoolein(GM0).Methods：Invitroculturedratskinflbroblastcells,MTTassayandagaroverlaywereusedtoevaluatetoxicitygradingofGMOonskinflbroblastcells.ResuIts：GMOshowednoeffectontheactivityofskinfibroblastcells・Thecytotoxicitywasgraded0
4、fortheculturedratepidermalcells・Conclusion：GMOhasnopotentialcytotoxicity,whichissuitableforthepreparationonskinadministrationwithexcellentbiocompatibility.[Keywords]Lipidbasedcubicliquidcrystalline；Glycerolmonoolein；Cytotoxicity近年来，两亲性脂质材料自组装成的立方液晶(lipidbasedcubic
5、liquidcrystalline)成为制剂载药系统研究的热点之一[1-3]。立方液晶不仅在体内有缓释、控释的优点，经皮给药优势也引起越来越多的研究者的注意。立方液晶载体常用的材料为甘油单油酸酯(glycerolmonoolein,GMO)。本文通过体外实验观察甘油单油酸酯对大鼠皮肤成纤维细胞的毒性作用，探讨该材料用于经皮给药制剂的可行性。1材料与方法1.1材料与仪器C02恒温培养箱(美国Thermo公司)；倒置光学显微镜(日本Olympus公司)；甘油单油酸酯(DIM0DANHRM0/D，纯度290%)由丹麦丹尼斯克馈赠
6、；新生SpragueDawley(SD)大鼠购于中山大学医学院动物中心;DMEM培养基（Gibco公司）；新生小牛血清（NCS,Gibco公司）；醛固酮（Sigma公司）；胰蛋白酶（Difco公司）；MTT（Sigma公司）。其他常用生化试剂均为国产分析纯。1.2实验方法1.2.1SD大鼠皮肤成纤维细胞的制备取新生2dSD大鼠，处死后无菌条件下75%酒精浸泡5min消毒，剪去头、尾、四肢，剪开背部皮肤，分离并使其剥脱下来，把大鼠皮肤放在冰冷0.1%PBS液（含青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml）中冲洗3次,眼科剪
7、子剪成1mm3大小放入0.1%胶原酶中37£水浴消化2.5ho滴管吸出消化液，加10%新生牛血清的❷糖DMEM培养液中止消化，1000r/min离心10min,371、5%C02培养箱培养,2d后换液。倒置相差显微镜下观察细胞形态改变。1.2.2试样制备约1g甘油单油酸酯经高压湿热灭菌后,置于无菌试管中，加入DMEM培养液20ml,于37*下静置浸渍72h,得到该材料的浸提液。用DMEM将浸提液分别稀释至原浓度的25%、50%、75%备用。1.2.3MTT法检测细胞毒性以50卩1/孔将细胞悬液置于96孔板，每孔细胞数为1X
8、104个。24h后实验组用25%、50%和75%浓度浸提液交换，空白对照组加DMEM,每组6孔。24h后加入0.5%MTT溶液100卩1/孔，继续培养4h。吸除孔内溶液,加入二甲亚枫100111/孔，轻轻振荡10mino分光光度计以490nm波长测光密度值(0D),DMSO作为空白对照。按下式计算出细胞
