胰岛自身免疫性抗体的检测及临床意

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1、胰岛自身免疫性抗体的检测及临床意人多数1性糖尿病是自身免疫性胰岛B—细胞损伤的结果，在这类病人血清中可以检测到多种口身免疫性抗体，包括胰岛细胞抗体（isletcellantibody,ICA）,谷氨酸脱竣嗨抗体（glutamicaciddecarboxyaseantibody,GADA）,蛋白酪氨酸磷酸fW样蛋白抗体（proteintyrosinephosphatase-likeproteinantibodies,IA-2As）及胰岛素自身免疫性抗体（insulinautoantibody,IAA）o口身免疫性抗体的检测对糖尿病的诊断，分型

2、，防治及高危人群中1型糖尿病的预报均有重要意义。11型糖尿病自身抗原及抗体1.1GAD：GAD是将谷氨酸转化为抑制性神经递质丫一氨基丁酸的限速酶，哺乳类动物中GAD有两种异构体，即GAD65和GAD67，两者基本结构相似，但在N—的100个氨基酸残基存在显著差别，因此两者的立体构像不同，抗原的表位也不同。在胰腺中主要表达GAD65,而在脑组织中主要表达GAD67oI型糖尿病中自身抗原为胰腺组织的GAD65o胰腺屮GAD65除在1型糖尿病中成为自身抗原外，在多发性自身免疫性内分泌综合症及一种较少见的疾病stiff-man中亦成为自身抗原。因此

3、，除了在1型糖尿病小可以检测到GAD65A外，在上述患者体内亦可检测的高滴度的GAD65Ao1.2IA-2:是一种跨膜糖蛋白，含979个氨基酸。结构上分为4部分，信号肽、胞外结构域、跨膜结构域及胞内结构域。其屮胞内结构域的竣基末端含有受体型蛋白酪氨酸同源性区域。主要在神经内分泌系统中表达，如胰岛B、&细胞；垂体、脑组织、肾上腺髓质等。其功能还不太明确。另外IA・2有一个异构体：IA-23,含有986个氨基酸，分子42%与IA-2—致。用基因重组的IA-2>IA-23分别作为抗原，在1型糖尿病中可以检测到TA-2抗体及IA-2P抗体,但发现大

4、多数IA-2P抗体阳性患者TA-2A也阳性，而IA・2A阳性者IA-23抗体大确为阴性，所以--般认为在1型糖尿病患者中主要产生TA-2AO1.3胰岛素（INS）：以上是1型糖尿病特异性抗原，因为其分子结构淸楚，已经可以由基因重组技术获得，而胰岛细胞抗体所对应的抗原不是单一的，而是一组抗原（故称ICAs）,包括上述抗原，当然也其他还有一些性质尚未明确的抗原。2自身抗体的检测方法及原理：口身抗体的检测有多种方法，我们介绍H前用于检测1型糖尿病自身免疫性抗体的较常川的方法及原理。口前测定GADA、IA-2As、IAA常川的方法有放射免疫法（放射

5、配体检测法，RLA；放射结合检测法，RBA）、酶联免疫法；用于ICAs测定的主要用间接免疫荧光法，另外也有用酶联免疫法及免疫组化法。2.1放射免疫法（RIA）：利川标记的己知抗原，测定患者血清内相应的抗体。以测定GADA为例：必I-GDA+患者血Y青（GADA）——>125I-GDA-GADA在上述反应体系中加入抗人免疫球蛋白抗体（二抗）及沉淀剂，弃上清液，测定沉淀物的放射性计数。计算结合率（测定管cpm—非特异管cpm/总管cpmXlOO%）,与正常对照组的结合率比较，结合率高于正常对照组97.25%个百分位者为阳性。该法是1=1前GAD

6、A、IA-2A及IAA的最常用方法。2.2酶联免疫法（ELISA）：常用间接法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下:1）将特异性抗原如（如GAD）与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除公耒结合的抗原及杂质。2）加稀释的受检血清，保温反应。血清屮的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原-抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血淸中的其他成份在洗涤过程中被洗去。3）加悔标抗抗体。可用卿标抗人Ig抗体（二抗）。固相免疫复合物中的抗体与卿标抗体抗体结合，从而间接地标记上

7、酶。洗涤后，固相载体上的酶塑与标木屮受检抗体的量正相关。4）加底物显色5）在分光光度仪上测定光密度。6）结果判断：与标准品的光密度比较或高于正常对照组97.25%个百分位者为阳性。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时川粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以捉髙试验的特异性。2.3间接免疫荧光法：主要川于ICAs的测定。首先将人胰腺组织切成薄片，放在载体玻璃上，加待检血清加，在湿盒中37°C保温30min,使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结

8、合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体。如果患者血清中含有ICAs,则第一步会发牛抗原抗体反应，标记的荧光抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而使切片上肌岛看荧