武汉东康源高效液相色谱法测定饲料中磺胺喹恶啉方法研究DKY

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1、武汉东康源科技实验室为您提供木方法提取操作简便、快捷，通过上述实验考查。此色谱条件下，分辨率高，干扰少，适用于配仑饲料、浓缩料及添加剂预混合饲料中磺胺睦恶咻的测定。方法最小检出浓度满足实际监督检测需要，具有较好的准确度及精密度。高效液相色谱法测定饲料屮磺胺嗤恶嘛方法研究广泛用于养盒业，磺胺座恶麻加磺胺类抗生素兼有抗球虫作用。其口服后吸收迅速，但排泄缓慢，残留在组织器官及鸡蛋中时间长，人食用后，对人体发生耐药性等副作用。世界卫生纽•织(WHO规定动物纽织、奶的最高残留限量(MRL值为100ug/kgFl本等国规定肉鸡屮不得检出。因此，该药的使用应严格控制用药期及用药量，以保证产品的

2、平安及对外贸易疏通。磺胺嗪恶I林纯品为黄色粉末，据英国兽费典记载。几乎无味，不溶于水，溶于甲醇、乙醇,易溶于碱性溶液。目前，饲料屮磺胺吟恶咻的检测方法美国AOAC规范是采川分光光度法,该法要求含阿散酸及不含阿散酸的饲料采用两种不同的测定方法。而国内饲料目询添加组分较复杂，检测者对饲料情况是未知的难以确定用哪一个方法；H该方法中盂要重氮化试剂做偶仑反应，其毒性人，对操作者及环境都会造成危害。因此，没有采用该法。另外，还有文献报道用气和色谱法测定，中间仍需重氮化衍半。最终选用高效液相色谱法。1•测定方法离心，过滤，HPLC仪上分离,1.1原理用甲醇水溶液提取饲料中的磺胺唾恶麻。紫外检

3、测器240nm处测定。1.2试剂和溶液除特別注明外均为分析纯试剂；水为蒸憎水，以下所用的试剂。色谱用水符合GB僧6682规定的一级水。121磺胺嗤恶I#标准品：含磺胺嗤恶Rtf(C14H12N4O2S95.0%。1.2.2甲醇：色谱纯。1.2.3磷酸盐溶液：取磷酸二氢钾3.40g和磷酸氢二钾5.71g加水溶解并稀释至lOOOmL置4°C冰箱中避光保存，124碱胺嗤恶嚇标准溶液：准确称取碱胺嗤恶1林(4.150吨溶于叩醉并稀释成0.1mg/mL贮藏液。启效期1个月。临用前，取此贮藏液用水稀释成适当浓度的规范工作液。1.2.5提取液：甲醇l()()mL+水5()mL1.3仪器131实

4、验室常川仪器设备1.3.2高效液相色谱仪（配紫外检测器）1.3.3分析天平：感量为0.000lg和0.00lg1.3.4旋涡振荡器1.3.5离心机：4000r/min1.3.6针头过滤器：备孔径为0.45nm微孔滤膜1.4分析方法1.4.1提取精确至0.00lg加入提取液（4.550mL旋涡振荡器混匀，称取5g试样。超声水浴中提取15min中间取出摇动1次,然后4000r/min离心5min静置,取上清液过0.45um滤膜，供液相色谱测定。142规范曲线的制备用水或流动相稀释成浓度分别为0.100.501.002.0010.0Ug/mL碱胺唾恶喊标准溶液，准确吸収贮藏液适量。做出

5、规范曲线。143测定1.4.3.1色谱条件色谱柱：C18柱柱长150mm柱内径4.6mm粒度5um或性能相当者"。并超声脱气。流动相：磷酸盐溶液75mL+rp醇25mL用前过0.45um滤膜。流速：ImL/min检测波长：240nm进样最：1020UL1.4.3.2定性与定量定屋由规范躺线或单点校准。根据规范品的保管时间定性。144结果的计算每千克试样中含碱胺嗤恶I林的质虽按下式公式计算：mlx=Dmx每千克试样屮磺胺嗤恶啦的质量（mgml拖尾峰（tailingpeak）。前者少见。＞色谱峰面积对应的碱胺嗤恶I林的质量（UgD稀释倍数；m所称样站的质量（g保管至小数点后1位。平行

6、测定结果用算术平均值表示。2.结果与讨论2」色谱条件的确定而磺胺嗓恶咻在该体系下出峰时间是56min影响检测效率。改用磷酸盐/甲醇体系做流动和。大多数横胺类药物常以磷酸/乙席体系做为流动相。磺胺嚨恶嚇的保管时间发生了变化。通过改变磷酸盐和甲醇的比例。磷酸盐：甲醇磺胺嚨恶啦保留时间min70:304.8675:257.8080:2012.32出峰晚影响检测效率，出峰早碱胺嗤恶I林与杂质峰相互干扰。峰形变宽。磷酸盐与屮醇比例75:25较为合适。2.2方法线性与最小检出限对5.010.020.0100.0mg/kg添加浓度按上述方法测定。添加浓度（mg/kg5.010.020.0100

7、.0基线构成Zifl

8、积称峰面积。A=XoXh=2.507Oh=1.064Wh/2h＞峰面积3590671684122536771414线性方程为：y=7821.813601.6相关系数为：=0.9992方法最小检出浓度为5.0mg/kg磺胺嗓恶啦的使用剂量鸡配合饲料是60g/t能够检出低于用量10倍浓度己能满足检测需要。2.3方法的准确度与精密度每个浓度做5个平行，根据碱胺唾恶I林在配合饲料中允许使用量为60mg/kg取配合饲料分别制成560100mg/kg磺胺瞳恶I林添加试样