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1、微生物与生化药学专业毕业论文［精品论文］狗舌草中黄酮类和生物碱类活性成分的提取分离工艺研究关键词：狗舌草提取纯化工艺总黄酮总生物碱乙醇提取物抗白血病作用摘要：狗舌草为菊科植物狗舌草的全草，多年生草本，广布于我国北部、东北部及华东、西南各地，可全草入药，具有清热解毒、活血消肿、解痉抗溃疡等作用。近年来有研究报道：狗舌草60%乙醇提取物（主要含有水醇兼容性生物碱和黄酮类化合物）对小鼠淋巴性口血病L1210细胞有较强的抑制作用，另据中药大辞典记载“3g/ml的狗舌草对白血病细胞有抑制作用”，但目前国内外对狗舌草中抗白
2、血病有效成分的研究报道不多，有关狗舌草中有效成分提取纯化工艺研究的资料也甚少。木研究以狗舌草为原料，在前期药理实验的基础上，对狗舌草中总黄酮和生物碱类化合物进行提取、分离纯化工艺研究，并对其化学成分进行了定性和定量测定，为进一步分离狗舌草中黄酮和生物碱化合物提供理论基础。第一部分：狗舌草乙醇提取物的药理活性研究腹腔注射给药考察狗舌草乙醇提取物（30%、60%、95%）对L1210荷瘤小鼠的体重变化情况、平均存活天数、生命延长率及腹围的影响。结果显示狗舌草60%、95%乙醇提取物的抗白血病效果相对较好，考虑到节省
3、溶剂问题，选用60%的乙醇作为提取溶剂。第二部分:狗舌草活性组分的提取工艺优化采用单因素和正交试验相结合的方法，对提取时间、提取温度、提取次数、料液比4个因素进行研究，优化了狗舌草中总黄酮和总生物碱的提取工艺并进行了定性、定量试验。狗舌草总黄酮的最佳提取工艺：提取温度80°C,料液比1：10,提取时间3h,提取次数2次。最优提取工艺条件下的总黄酮提取率为0.523%，比色法测得总黄酮含量为6.897%。狗舌草总生物碱的最佳提取工艺：提取温度80°C,料液比1：10,提取时间3h,提取次数3次。最优提取工艺条件下
4、的总生物碱平均提取率为0.211%。第三部分:狗舌草总黄酮的分离纯化工艺优化采用D101型大孔吸附树脂对狗舌草总黄酮进行了纯化。考察静置吸附时间、上样液浓度、上样液pH值、上样流速、洗脱剂体积分数、洗脱剂体积、洗脱流速等条件对纯化效果的影响；得较佳的吸附条件为：静置吸附时间为24h,上样液浓度为0.5mg/mL,上样液pH值为6-8,上样液加样流速为2BV-h-l；较佳的洗脱条件为：洗脱剂选用体积分数为70%乙醇,洗脱液pH值为6-8,洗脱剂体积为2.5BV,洗脱流速为2BV•h-lo经D101大孔树脂处理后的
5、狗舌草总黄酮纯度是原来的2.3倍。第四部分：狗舌草中黄酮类化合物的初步分离利用硅胶以及凝胶柱对狗舌草乙酸乙酯萃取部分（总黄酮部分）进行了初步分离，并运用现代波谱技术对分离得到的化合物进行了结构鉴定。正文内容狗舌草为菊科植物狗舌草的全草，多年生草本，广布于我国北部、东北部及华东、西南各地，可全草入药，具有清热解毒、活血消肿、解痉抗溃疡等作用。近年来有研究报道：狗舌草60%乙醇提取物（主要含有水醇兼容性生物碱和黄酮类化合物）对小鼠淋巴性白血病L1210细胞有较强的抑制作用，另据中药大辞典记载"3g/ml的狗舌草对白
6、血病细胞有抑制作用”，但目前国内外对狗舌草中抗白血病有效成分的研究报道不多，有关狗舌草中有效成分提取纯化工艺研究的资料也甚少。本研究以狗舌草为原料，在前期药理实验的基础上，对狗舌草屮总黄酮和生物碱类化合物进行提取、分离纯化工艺研究，并对其化学成分进行了定性和定量测定，为进一步分离狗舌草中黄酮和生物碱化合物提供理论基础。第一部分：狗舌草乙醇提取物的药理活性研究腹腔注射给药考察狗舌草乙醇提取物（30%、60%、95%）对L1210荷瘤小鼠的体重变化情况、平均存活天数、生命延长率及腹围的影响。结果显示狗舌草60%、9
7、5%乙醇提取物的抗口血病效果相对较好，考虑到节省溶剂问题，选用60%的乙醇作为提取溶剂。第二部分:狗舌草活性组分的提取工艺优化采用单因素和正交试验相结合的方法，对提取时间、提取温度、提取次数、料液比4个因素进行研究，优化了狗舌草中总黄酮和总生物碱的提取工艺并进行了定性、定量试验。狗舌草总黄酮的最佳提取工艺：提取温度80°C,料液比1：10,提取时间3h,提取次数2次。最优提取工艺条件下的总黄酮提取率为0.523%,比色法测得总黄酮含量为6.897%o狗舌草总生物碱的最佳提取工艺：提取温度80°C,料液比1：10
8、,提取时间3h,提取次数3次。最优提取工艺条件下的总牛物碱平均提取率为0.211%。第三部分:狗舌草总黄酮的分离纯化工艺优化采用D101型大孔吸附树脂对狗舌草总黄酮进行了纯化。考察静置吸附时间、上样液浓度、上样液pll值、上样流速、洗脱剂体积分数、洗脱剂体积、洗脱流速等条件对纯化效果的影响；得较佳的吸附条件为：静置吸附时间为24h,上样液浓度为0.5mg/mL,上样液pH值为6-8,上
