细胞培养的研究

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1、细胞培养的研究摘要：细胞是生物体基本的结构和功能单位。细胞可分为两类：原核细胞、真核细胞。细胞的特殊性决定了其个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。所以，细胞培养是研究细胞的一个必不可少的过程。细胞培养，既包括微生物细胞的培养，也包扩细胞培养技术，可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。本文阐述了细胞培养的发展进程，

2、细胞培养的一般方法，以及细胞复苏、培养基血清浓度、传代时间及冻存条件等对细胞培养的彤响和细胞培养在实际生活中的应用。关键词：细胞；细胞培养细胞是牛命的基木单位，研究细胞培养已经成为当代生物科学中发展最快的一门尖端学科，是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程⑷。早在30年代细胞培养技术就己传入我国。张钧、鲍鉴清教授曾分别在上海和北平倡导过细胞培养方法，并进行了一些实验工作。1952年鲍鉴清在天津建立了组织培养实验室并编写了《组织培养技术》(1954)之后，北京、上海、武汉、长春等地也相继建立了用于一些研究或制备牛物制品的细胞培养室。60

3、年代细胞培养技术有了进一步的发展。70年代后，在我国细胞培养已不再是个别实验室所拥有的技术，已成为医学和生物学研究中普遍应用的手段⑵。20世纪70年代以来，我国的组织培养技术发展更快，它已经不再是个别研究室所拥有的技术，而是已成为生物学和医学研究中普遍应用的手段。近二十年来已建立了人和各种动物肿瘤及其它细胞系。细胞培养用品，培养基、血清、试剂等也己商品化⑶。随着市场经济的繁荣、高科技的引入和发展，一次性培养用品也逐渐使用，各种精巧的培养用品不断进入实验室，极大地促进了培养技术的发展。1细胞培养的发展进程任何事物都有一个由简单到复杂、由初级到高级的发展过程。细

4、胞培养也是如此，其发展经历了近百年的时间。1885年德国人Roux曾用温生理盐水在体外培养鸡胚组织并使Z存活了数月，这被认为是组织培养的萌芽试验。1906年Bccbc和Ewing用盖片悬滴培养法，以动物血清做培养基，培养狗淋巴细胞存活了72小时。现代细胞培养是从Harrison(1907)和Carrel(1912)两人开始的⑷。Harrison参考前人经验，创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法。此法的基本技术是在无菌条件下，采用淋巴液做培养基，培养蛙胚神经组织生活了数周，并观察到神经细胞突起的生长过程。由此建立了体外培养组织和细胞的基本模式系统。Carrel用血

5、浆包埋组织块外加胎汁的培养法，并采用了更新培养基和分离组织的传代措施，曾培养一鸡胚心肌组织长达数年之久。1923年Carrel又设计了卡氏瓶培养法，扩大了培养空间。从50年代起，细胞培养进入了迅速发展的阶段。相继有很多学者从改进培养操作方法，培养容器和培养液三个方面，作了很多革新。在卡氏瓶原理的启示下，出现了用试管培养，以后人们又设计出多种类型的培养瓶。培养基由天然动物血浆改进为应用人工合成培养基，促细胞生长物质由胎汁改为动物血清。与此同时，培养技术方法的革新进展也非常迅速。Dulbecco(1957)等采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层

6、细胞培养，此后单层培养便成了组织培养普遍应用的技术，并建立了许多细胞系⑷。50年代末，随着生物科学和技术科学的相互渗透，遗传学和生物化学的相互结合,出现了分子遗传学、分子生物学、细胞工程等新兴科学，这些新科学的形成和发展都与细胞培养有密切关系。当前细胞培养技术已广泛用于生物学和医学研究的各个领域，岀现了用各种理化措施诱发岀遗传缺失细胞株、应用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体、用培养细胞检测环境中可疑致癌物质、癌基因转染和细胞转化等。在连续灌注培养工艺方面，美国Ohashi,Ryo等人2001年报道采用2L—次性生物反应器灌注培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体，以Bec

7、tonDickensonCellMab+10%胎牛血清+1%聚KF-68为培养基，最高活细胞密度超过1X107cells/mLC5]；2001年瑞士Heine,Holger等人用带超声细胞分离器(UCS)的连续灌注搅拌罐生物反应器培养鼠杂交瘤细胞生产单克隆抗体，稳态培养时活细胞密度超过2X107cells/mL[6]；2004年徳国Thomas等人在1L搅拌罐生物反应器中培养rCHO细胞生产人MUC-1糖蛋白，采取葡萄糖浓度限制的高产率灌注工艺减少有害代谢物，代谢转向TCA循环增加，活细胞密度保持在(1〜2)X107cells/mL[7：o在流加悬浮培养工艺

8、方面，美国麻省理工XieLiangzhi等人2000