[精品]仪器分析重点

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1、仪器分析一、透射电子显微镜：1.电子束与物体的作用方式：电子束与物质作用后，会产生二次电子，背散射电子，吸收电子（这三个应用于SEM）,俄歇电了，特征X射线以及荧光或者透射电了（TEM）。2.透射电镜结构及成像原理：结构：电了光学系统，真空系统，电源系统，操作控制系统，观察系统成像原理：在真空条件下，电子束经高压加速后，射到质虽:、密度大的样品并穿透样品时形成散射电子和透射电子，主要的成像作用是散射作用。样品上致密和较厚的部分対电子的散射角大，被物镜卞方的物镜光阑拦掉，这样通过的电子较少，像的亮度较暗，反之则为亮区。这种衬度称散射吸收衬度，可以提

2、供样品形态方面的信息。3.透射电镜生物样品制备的常规程序:取材一一漂洗一一前固定——漂洗一一后固定——漂洗一一梯度脱水一一浸透——包埋——聚合——超薄切片——电了染色——TEM观察4•负染色技术及其应用：定义：染液小的高电子密度物质包围低电子密度的样品，染色结果使背景是黑昭的，而样品部分呈“透明”的光亮区，故称之为负染色。应用：川于观察生物大分了、病毒、细菌、分离的细胞器以及蛋白质晶体等颗粒性物质的结构、大小以及形状等。5.电子显微镜基本类型及用途：透射电镜用来观察细胞内结构和扫描电镜观察组织或细胞农面的立体结构。6.电子照明系统由电子枪和聚光镜

3、组成。7.—般生物医学常用透射电镜性能指标：分辨率（最主要，由点分辨率和线分辨率组成），放人倍数，加速电压。8.透射电镜相关技术：透射电镜生物样品制备技术，超薄切片技术，负染色技术，免疫电镜技术。9.电镜标本观察条件：高真空、高电压、能够散射电子。二、扫描电镜：1•扫描电镜的成像原理是什麽。打描式电了显微镜的电了束在样品农面打描激发出二次电子，背散射电子等。放在样品旁的检测器接收这些电&通过放人后调制显像管的电了束强度，从而改变显像管荧光屏上的壳度。显像管的偏转线圈与样品表而上的电了束保持同步扫描，这样显像管的荧光屏就显示岀样品表血的形貌图像，这

4、与工业电视机的工作原理相类似。2.扫描电子显微镜的图像优缺点。优点：焦深大，图像富有立体感，特别适合丁•表面形貌的研究；放大倍数范围广，从十几倍到2万倍，几乎覆盖了光学显微镜和TEM的范围；制样简单，样品的电子损伤小。缺点：荷电效应，损伤，边缘效应，污染。3.什么是荷电效应？如何避免。样品导电差，会吸收电子而带负电，产生静电场干扰入射电子束和二次电子发射，电荷累积到一定程度会放电，对图像产生严重的影响避免：增强导电，降低工作电压，快速观察法4•扫描电镜生物样品制备要求。保持外表和结构的原始形态，清洗、固定好需要干燥处理的样品，要保持干燥后样品表面

5、不变形金属镀膜使样品表面具有良好的导电性能和二次电子发射率，减少荷电效应5.简述临界点干燥法原理及其过程。原理：临界点干燥法是利用物质在临界状态时，其表而张力等于零的特性，使样品的液体完全汽化，并以气体方式排掉，来达到完全干燥的II的。过程：样品预处理-一►放置样品-—►注入液体C02置换►临界处理——放气取样5.扫描电子显微镜是一种利用电子束扫描样品表面从而获得样品表面信息的电子显微镜。7.SEM与TEM的主要区别：在仪器构造上：除了光源、真空系统、电源系统相似外，检测系统完全不同。在原理上：SEM不是用透射电子成像，而是用二次电子加背景散射电

6、子成像。8.SEM结构：真空系统；电子束系统：电子枪，电磁透镜；成像系统。9.边缘效应：样品表面凹凸变化大的边缘区域，二次电子散射的面积增大，结果便边缘区域二次电子发射异常地增加。图像中这些区域特别亮，造成不口然地反差，称为“边缘效应”10.SEM工作特点：高真空，高电压，需要良好导电性能。11.生物样品的干燥方法：空气干燥法：含水极少样品头发、指甲等；临界点T燥法：含水较多样品；冷冻干燥法：含水较多样品。12.样品表面的导电处理：金属镀膜法：真空镀膜法，离子溅射镀膜法；组织导电法：碘化钾导电染色法，碘化钾-醋酸铅导电法，丹宁酸一餓酸导电法。三、

7、原子吸收分光光度法1•原子吸收分光光度法的基本原理当特征辐射能通过原了蒸气时，基态原了从辐射中吸收能量，最外层电了由某态跃迁到激发态。因此根据光被吸收后减弱的程度就可以判断样品中待测元素的含量。2.影响谱线变宽的因素：口然变宽、多普勒变宽、压力（碰撞）变宽、塞曼变宽、斯塔克变宽等。3.原子吸收分光光度计构成：光源，原子化器，分光器，检测器，数据处理。4.原子吸收分光光度计光源分类：空心阴极灯和无极放电灯。5.原子化器：火焰原子化器：化学计量火焰，贫燃火焰，富燃火焰；无焰（石墨炉）原子化器；氢化物发生器。6.原子吸收分光光度法的条件：发射线必须比吸

8、收线窄的多；发射线的中心频率（波长）与吸收线一致，J1有足够强度。7.测定的方法：标准Illi线法、标准加入法、内标法。四、分子荧光光谱