白藜芦醇改善高脂饮食小鼠糖代谢并棕化腹股沟白色脂肪

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1、白藜芦醇改善高脂饮食小鼠糖代谢并棕化腹股沟白色脂肪摘要目的：观察白藜芦醇治疗对高脂饮食诱导肥胖小鼠的体重，体脂比及血糖代谢的作用，初步探索白藜芦醇对白色脂肪棕化的作用。方法：小鼠高脂饮食(45%热量来自脂肪)8周后随机分为对照组(HFD-Con)和白藜芦醇治疗组(HFD-Res,白藜芦醇400mg/kg),治疗2周后称重、测定糖耐量和计算体脂比例，实时PCR测定腹股沟皮下白色脂肪组织解耦联蛋白T(UCP-1)和CIDEA基因表达。结果:与HFD-Con组相比，HFD-Res组体重下降明显，糖耐量改善,脂肪组织/体重比无改变；而腹股沟皮下白色脂肪组织解耦联蛋白

2、T(UCP-1)和CIDEA基因表达升高。结论：白藜芦醇治疗可降低高脂饮食诱导肥胖小鼠体重和改善糖代谢，同时可能促进腹股沟皮下白色脂肪组织棕化。关键词高脂饮食白色脂肪组织解耦联蛋白-1CIDEA白藜芦醇糖耐量中图分类号:R965文献标识码：A文章编号:1006-1533(2014)01-0055-04随着生活质量的改善，肥胖呈逐年上升趋势，而肥胖相关性疾病如2型糖尿病、高血压、心脑血管病、肿瘤等成为全球性负担［1］。肥胖因能量摄入超过消耗于体内积累所致,因此减少能量摄入和/或增加能量消耗为有效治疗办法。近年来临床研究发现成人体内存在棕色脂肪组织［2］。与白色

3、脂肪组织的储存能量作用不同，棕色脂肪组织可通过增加产热而促进能量消耗，且试验显示棕色脂肪组织移植可减少小鼠脂肪组织并且改善糖脂代谢［3］,故如何激活棕色脂肪组织成为肥胖研究领域中的热点［4］。2012年美国哈佛大学Spiegelman教授等［5］的研究首次发现白色脂肪组织中存在一种介于棕色和白色脂肪细胞之间、可被激活而发挥棕色脂肪细胞功效的细胞米色脂肪细胞(brite/beigeadipocytes)o激活米色脂肪细胞即棕化白色脂肪组织发挥产热功效将有助于减轻体重。白藜芦醇(resveratrol)是一种天然多酚类化合物，存在于多种葡萄皮和坚果等天然食物中。

4、现已证实白藜芦醇有抗衰老，心血管保护，抗肿瘤，抗氧化及炎症，并有抵抗高脂饮食诱导肥胖和改善糖脂代谢的作用［6-7］o基础研究显示白藜芦醇是NAD+依赖的脱乙酰酶(SIRT-1)的激动剂，且已有研究表明SIRT-1有诱导皮下脂肪棕化的作用［8］。白藜芦醇可否诱导动物体内皮下脂肪棕化目前尚不明确。本研究旨在观察白藜芦醇治疗对高脂饮食诱导肥胖的小鼠的体重、体脂及血糖代谢的作用及对白色脂肪棕化标志性基因解耦联蛋白T(uncouplingprotein1,UCP-1)mRNA和CIDEA(celldeath—inducingDNAfra.gmentationfacto

5、ralpha-likeeffectorA,CIDEA）mRNA的测定,初步探索白藜芦醇对白色脂肪棕化的作用。1材料和方法1.1动物实验10只4周龄雄性C57BJ/6小鼠购自复旦大学实验动物科学部。所有动物实验操作及流程都经复旦大学动物实验中心伦理审查通过。在实验过程中，所有小鼠都饲养在12h黑夜/12h白天的昼夜循环中，并保持环境温度20〜25°Co期间，小鼠自由摄食及饮水。小鼠高脂饮食（购自上海斯莱克实验动物有限公司，45%热量来自脂肪）8周后，随机分为白藜芦醇（购自上海诺特生物科技有限公司）治疗组（HFD-Res）和对照组（HFD-Con）。白藜芦醇悬浮

6、于0.5%発甲基纤维素溶液中，每日剂量400mg/kg，灌胃给药，治疗2周。对照组每日予等容积的0.5%務甲基纤维素溶液灌胃。记录干预前后体重。1.2腹腔糖耐量试验（ipGTT）小鼠空腹6h后，以1g/kg的剂量腹腔注射10%葡萄糖溶液，并通过尾尖针刺取血，罗氏ACCU-CHEKPerforma血糖仪测定0、10、20、30、45、60、75和90min血糖。1.3动物处理和标本ipGTT后2d,小鼠空腹6h后麻醉，心脏采血分离并留取血清于-80工冰箱保存；取肝脏及肩胛棕色脂肪组织，腹股沟、附睾和肾周白色脂肪组织，称重后部分用4%甲醛固定，部分于液氮冷冻后转

7、移至-80工冰箱保存备用。1.4腹股沟白色脂肪组织UCP-1和CIDEAmRNA表达测定小鼠腹股沟白色脂肪组织的总RNA用trizol(Invitrogen公司)提取。总RNA(1?g)通过逆转录试剂盒(TAKARA,RR047A)逆转录成cDNA。cDNA模板加入20?1SYBRGreen反应系(TAKARA,RR420A)及特定引物。UCP-1引物序列：上游引物CTGCCAGGACAGTACCCAAG,下游引物TCAGCTGTTCAAAGCACACA。CIDEA序列：上游引物ATCACAACTGGCCTGGTTACG,下游引物TACTACCCGGTGTC

8、CATTTCTo所有引物委托生工生物工程(上海)有限