pcr扩增实验报告

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1、per扩增实验报告增实验报告篇一：DNA提取及PCR扩PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428环墟科学一、实验目的1.学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。2.对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。二、实验原理Si1PCR扩增多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核昔酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94°C）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。降低溶液温度，使合成引物在低温（55

2、°C）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温per扩增实验报告增实验报告篇一：DNA提取及PCR扩PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428环墟科学一、实验目的1.学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。2.对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。二、实验原理Si1PCR扩增多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核昔酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（9

3、4°C）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。降低溶液温度，使合成引物在低温（55°C）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温(72°C),在Tap酶作用下，用四种dNTP为原料，引物％复希屉皆，檢板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环，使产物DNA重复合成，并在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA的量按指数方式扩增。经过30〜40个循环，DNA扩增即可完成。2.

4、DNA琼脂糖凝胶电泳实验DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛兹应，即分手本身葩大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。不同构型的DNA分子的迁移速度不同。该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在淙动時的直荷效血和分字筛效应，达到分离混合物的目的。三、实验材料仪器：PCR扩增仪、0・2ul薄壁管、l・5ml离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射役。试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引

5、物、16S全丧DNA样本、无菌ddH20、模板DNA、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。四、实验步骤1.PCR扩增本次试验选择细菌16SrDNAV3区片段进行扩增。1.1根据计算，首先取1.5ml离心管按照2.5ul10XBuffer、1uldNTP、0.5ul341GC>0.5ul534、0.125ulTaq>19.375uddH2O的比例配置足量的PCR反应体系o1.2分别向9个薄壁管中分别加入24ul的反应体系，并分别添加8种不同的模版，并于第9个薄壁管中加入无菌ddH20作为阴性对照。1.3将薄壁管放入PCR扩增仪中，按照预定程序进行P

6、CR扩增。其中循环过程需要达到30F0次。程序如下：预变性：94°C3min宿环：94°C变性30s55°C退火30s72C延彳申30s末次延伸：72C5min1.4PCR扩增完成后，将样品取出并保存于15°C环境中。2.DNA琼脂糖凝胶电泳实验2.1称取0.2g琼脂糖粉末，放到一锥形瓶中，加入适量的0.5XTBE电泳缓冲液。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。摇匀，待冷却至60°C左右，在胶液内加入适量的EBo2.2取有机玻璃制胶板槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60°C左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。2.3待胶凝固后，小心

7、拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。2.4在槽内加入0.5XTBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。取1卩1缓冲液和5UI特测DNA样品混合后，用彩液枪滴加至凝胶的加样孔中。2.5接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高不超过5V/cm,开始去泳。点律端故胡祓端。根据经验调节电压使分带清晰。III2.6观察漠酚兰的带（蓝色）的移动。当其移动至距胶板前沿约lcm处，可停止电泳。1=2.7在紫外透视仪的样品台上重新铺上一张保鲜膜，赶去气泡平铺，然后把凝胶放在上面。关上样品室外门，打开紫外灯，通过观察孔进行观察。蓝、实验结果鸟讨论

8、如图所示：从左至右，分别是模版1-8#,第9列为阴性对照。前8列均有明显的条带出现，而阴性对照无显示，说明扩增整体效果很好。图中有上下两条线，上面一条线所覆盖的条带基本可以代表扩