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《口腔扁平苔藓及口腔幽门螺杆菌临床探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、口腔扁平苔裨及口腔幽门螺杆菌临床探究【摘要】目的探讨口腔黏膜扁平苔蘇患者与其口腔中的幽门螺杆菌(HP)的相关性。方法设计HP特异的尿素酶C和cagAPCR引物，检测48例口腔黏膜扁平苔蘇患者口腔黏膜的HP与正常人黏膜进行比较。结果实验组的HP阳性率为72.3%,对照组为40.5%,两组差异有统计学意义(P<0.05)o结论HP参与了口腔黏膜扁平苔蘇的发生，HP与口腔黏膜扁平苔聲有相关性。【关键词】幽门螺杆菌聚合酶链反应扁平苔鐸中图分类号：R780.2文献标识码：B文章编号：1005-0515(2011)6-137-021989年Krajden等首次从胃炎患者的牙菌斑内分离出幽门螺旋杆菌(he
2、licobacterpylori,HP),口腔已成为HP定植的聚集地,口腔粘膜扁平苔(OralLichenPlanus,OLP)是是临床上较为常见且发病率较高的一种口腔粘膜病。目前其发病原因不明，近年来研究表明幽门螺杆菌也存在于口腔中，本研究通过检测在糜烂型口腔扁平苔癣患者口腔黏膜中HP,进一步探讨HP与OLP的关系。1材料和方法1.1研究对象选择2007年9月〜2009年9月在就诊我科48例初诊OLP患者，其中男性18例，女性28例，平均年龄39.2岁，纳入标准：(1)经病理检查确诊为OLP；(2)无明显胃肠疾病、糖尿病及免疫性疾病；(3)无II度或II度以上牙周炎；⑷无复发性口腔溃疡或其
3、它口腔粘膜病；(5)1月内未服用抗生素、钱剂、抗酸剂、H2受体拮抗剂及类固醇类药物或非类固醇类抗炎药；(6)女性需为不处于妊娠及哺乳期。对照组为健康人群50人。1.2标本采集每例患者取5份标本：消毒棉签刮取颊、唇、舌、口底、上腭黏膜后分别浸入装有5ml无菌生理盐水的Ep管内，放入一20"冰箱保存备检。对照组选择健康人群的正常黏膜：切取糜烂组织约米粒大小浸入装有5ml无菌生理盐水的Ep管内用于PCR检测尿素酶C基因和cagA基因表达。3标本处理3.1提取DNA样本悬浮于100u1灭菌生理盐水中56°C孵育30min,高速震荡10s后置10(TC水浴8min,再次高速震荡10s,离心(12000
4、r/min,4°C)3min,取上清用于PCR扩增。口腔含漱液经离心(12000r/min,5min)后弃去上清,加入灭菌生理盐水200u1,随即按上述过程提取DNA。3.2引物的设计与合成设计尿素酶C及CagA的PCR引物，分别为5'-AAGCTTTTAGGGGTGTTAGGGGTTT-3'及5，一ttgCCGCTTTTGCTCTC-3',由上海生工生物科技有限公司合成。3.3PCR引物溶于三蒸水中，将正向(上游)和反向(下游)引物以各10umol/L的浓度稀释混匀后分装于小管中，-20£保存。扩增体系为模板DNA2U1(0.5ug),尿素酶C基因10umol正向引物和反向引物各1卩1,1
5、0*TransTagHiFiBuffer15u1,2.5mmoldNTP4u1,TransTagHiFiDNAPolymerase1n1(5U/n1),三蒸水36uICagA基因的扩增体系同尿素酶C基因。扩增条件：941预变性5min.94°C30秒、60°C30秒、72°C60秒，共计40个循环，最后72°C延伸5minoPCR扩增产物用20g/L的琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶内含有0.5mg/L的漠化乙锭(EB),电泳缓冲液为TBE(Tris碱+硼酸)。扩增完毕后，取10ul扩增产物与1u1漠酚蓝混匀并电泳(60v,lh),用紫外透射仪检查，与DNAmarker做分子量的对照，CagA片段的
6、PCR扩增条件相同。3.4结果判定在294bp处出现特异性条带，是尿素酶C基因表达阳性；在397bp处出现特异性条带，是CagA基因表达阳性。每个样品各行3次PCR实验，以其中至少两次结果阳性者为Hp阳性者。4统计学处理采用SPSS13.0软件进行，P<0.05为差异有统计学意义。5结果实验组的HP阳性的患者有39人，阳性率为81.2%,对照组HP阳性的患者11人，阳性率为22%,两组差异有统计学意义(P〈0・05)6讨论0LP是口腔粘膜较常见的癌前状态，也是常见的口腔疾病之一，OLP的发病原因迄今不甚明确，可能的发病原因有感染因素、免疫因素、神经精神因素、系统性疾病等。1989Krajde
7、n等首次从胃炎患者的牙菌斑内分离出HP,口腔已被认为是HP定植的聚集地。目前已经发现口腔HP与复发性口腔溃疡、口腔扁平苔蘇、牙周炎等疾病相关。口腔环境适合Hp生长，菌斑、唾液及多处口腔粘膜组织均检出有Hp。本研究表明，与对照组相比，扁平苔癣病例组HP阳性率明显提高，两组存在有显著性差异，说明病例组中HP的存在率远远高于正常组，对由于扁平苔癣患者局部免疫力下降致使细菌(HP)更易入侵和定居的假说提供支持。OLP
