植物生理实验论文,颖

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1、低温胁迫对菠菜叶片抗寒性的影响王新颖王文岩(东北农业人学、农学院、哈尔滨市、150030)【摘要】：植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。在正常的情况下，细胞膜对物质具有选择性能力。植物组织受到逆境伤害时，由于膜的功能受损或结构破坏，而使其透性增大，细胞内的盐类或有机物将有不同程度渗出，从而引起组织浸泡液电导率发生变化，通过测定外渗液电导率的变化，就可以反映出质膜的受害程度和所测材料抗逆性的人小。伤害越重，外渗越多，电导率的增加也越人；在过氧化物酶催化下，过氧化氢将愈创木酚氧化成棕褐色产物，此产物

2、在470nm处有最人吸收峰值，故可通过测470nmK的吸光值变化测定过氧化物齣的活性。过氧化物猶活性以每毫克蛋白质每分钟内的活性单位来表示。本次实验主要是通过菠菜在低温胁迫条件下，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，通过实验使我们了解低温胁迫对菠菜叶片抗寒性的彫响。【关键词】：菠菜、低温、抗逆性、外渗电导率、过氧化物酶活性0前言菠菜(Spinach)是人们经常食用的主要蔬菜。它属于藜科菠菜加的1、2s生草本植物。在华北的大部分地区，耐寒性较强的尖叶菠菜町以安全越冬，因此了解低温胁迫对菠菜的生理影响，探索波菜的抗寒住理机制，

3、对丁•通过基因工程手段提高冷敏感植物的抗寒能力，选育抗寒性强的詁种及其栽培管理都有重要的意义。为此，研究了菠菜在秋、冬季节随着温度的降低，叶片与根的可溶性糖、游离脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)的含：S、超氧化物歧化酶(SOD)的活性，以期了解菠菜在白然环境低温的冷驯化过程屮，这些抗性指标的变化及其与抗寒性之间的关系。［1］虽然植物本身具有一定的抗寒性，可是不同植物种类和品种有不同的抗寒性，不同器官的抗寒性也不一样。植物抗寒性也能通过一些途径提高，这对于避免和减少寒害损失有重要意义。近年来，许多植物的抗寒性研究取

4、得了可喜的进展，主要就抗寒性的生理基础，提高杭物抗寒能力的研究以及抗寒育种途径等方面进行阐述［2］。近20年來，分子牛物学的迅猛发展，对于揭示植物抗寒机理和提高抗寒力方血起了重要的作用。但总体来说，利用分子生物学技术进行植物抗寒性研究还比较薄弱，有许多急待解决的问题。［3］首先体现在植物的抗寒分了机理特别是信号转导及调控基因的表达,抗冻蛋口的结构特征和生理功能研究得不够深入，还处于开始阶段，而抗寒分子机理研究影响着抗寒基因工程的应用。［4］抗寒基因工程大多是围绕着单个基因研究，而植物的抗寒性是多基因控制的，应该结合

5、多个相关基因进行系统的研究。［5］冃前植物的抗寒性研究大多集中在作物、果树、蔬菜上，对于园林观赏植物研究得较少。而现在人们对于热带亚热带观赏植物的需求快速增长，这些植物恰恰山于地域气候的限制并不耐低温，因此观赏植物的抗寒性机理研究，以及如何提高观赏植物抗寒力将是今后重要的研究方向［6］。1材料与方法1.1材料菠菜(Spinach)>市售1.2方法(一)外渗电导率的测定1、取菠菜叶片打孔40片，分成4份，至于4个小烧杯屮。2、将两个烧杯屮的叶片放入冰箱屮冷处理lOmino3、取蒸憎水10ml测定电导率(So)o4、将

6、处理的和未处理的4份叶片分别放入注射器中，吸收10ml蒸憎水，堵住注射器口进行抽气至叶片全部沉入水中。5、将注射器内的蒸懈水和叶片倒入洁净烧杯中，再加入l()ml蒸镭水，摇匀后测定电导(St>)o6、测定后，将烧杯中的液体煮沸，冷却至室温，测电导(Sh)o(二)过氧化物酶活性的测定1、収0.5g叶片、加入少量磷酸缓冲液研磨至匀浆，转入离心管中，4000「、离心lOmin,然后取上清液定容至10ml,备用。2、测定样品对照pH5.5、0.05molPBS(ml)2.82.80.05M愈创木酚溶液(ml)1.01.02

7、%HQ2(ml)1.01.0酶液(ml)0.20.22%三氯乙酸(ml)2.03、470nm波长下测定吸光度，每隔30s记录数值;4、根据测录数据制作制作吸光度时间曲线。1.3生理指标的测定方法过氧化物酶活性的测定：愈创木酚法[7]过氧化物酶是植物体内普遍存在的，活力较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用、及生长素的氧化等都有密切关系，在植物牛长发育过程屮，它的活力不断发牛变化，因此测量这种酶，可以反映某一吋期植物体内代谢的变化。在H2O2存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻卬基苯酚，该物质在

8、470側处冇授大吸收峰，可川分光光度计测量470nm的吸光度的变化，从而测定过氧化物他的活力。AOD“o越大，说叨过氧化物酶活力越高，反之亦然，故可通过测470mn处的吸光度变化来测定过氧化物酶的活性[5]外渗电导率的测定：DDS-307电导率仪法[8]植物在遭受低温胁迫麻，细胞膜遭到破坏，膜透性增人，从而使细胞内的电解质外渗,以致植物细胞浸提液的电导率增大