栀子中京尼平苷微生物转化探究

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1、梔子中京尼平昔微生物转化探究作者：王永宏，苏建，王建芳，廖勇，冯杉，孙启玲【摘要】目的通过筛选一株高产B葡萄糖昔酶菌株对梔子进行发酵，使得其中的京尼平昔转化为京尼平。方法通过底物特异显色筛选模型筛选菌株，并使用正交实验对发酵条件进行优化。结果筛选到一株产B葡萄糖昔酶酶活可达到8.2u/ml的青霉Penicilliumnigricans,并优化了发酵转化条件，使得京尼平昔的转化率可达到95%以上。利用波谱法对发酵产物进行了结构鉴定，证明转化产物为京尼平。结论通过微生物转化的方法可以使梔子中主要成分京尼平昔转化成具直接作用的有效成分京尼平。【关键

2、词】梔子京尼平昔青霉京尼平微生物转化Abstract：ObjectiveGardenio(GardeniajasminoidesEllis)wassubjectedtofermentationprocessbyBglucosidasestraintotransformgeniposideintogenipin,amoreeffectivecompound.MethodsThemodelofspecificcolorizingwasusedtoscreenthestrain.Theconditionsoffermentationprocessw

3、ereoptimizedbyanorthogonallayout・ResuItsThroughthemodelofspecificcolorizing,thestrainwithhighabilityofmicrobialtransformationhasbeenscreened.Thetransformationratecouldreachto95%・Itwasprovedthattheproductswasgenipin.ConclusionGeniposidewhichwastheeffectivecompoundofgardeniac

4、anbetransformedintogenipinbythemethodofmicrobialtransformation.Keywords：Gardeniajasminoides；Geniposide；Penicilliumnigricans；Genipin；Microbialtransformation梔子是茜草科(Rubioceoe)梔子属(Gardenia)植物，入药部分为其干燥成熟果实，性味苦寒，归心、肺、三焦经。主要具有保肝利胆之功效，药效成分是以京尼平昔为代表的环烯瞇菇昔类，此外还含有有机酸类、色素类、挥发油等成分［l］o药代

5、动力学研究发现，梔子有效成分京尼平昔的利胆作用是通过肠道微生物产生的B葡萄糖昔酶水解所生成的京尼平而引起的［1］。日本MieInao等对梔子治疗肝硬化的研究表明，京尼平昔的水解产物京尼平能够抑制肝脏星状细胞的活性而达到对肝硬化疾病的治疗［2］。同时，已有研究证明京尼平亦具有显著抗炎、抗脂质过氧化、抗血管生成、抗NO生成［3］、抗淀粉B蛋白质的神经毒性等药效［4］,京尼平也是迄今为止所研究的环烯醞菇物质中抑制诱变剂诱变活性最强的物质[l]o京尼平还可被应用于生物材料的交联，它不仅能形成稳定的交联制品，同时具有细胞毒性小,生物相容性好，抗降解能力

6、强和应用领域广泛等优点，是非常有前途的生物交联剂。京尼平在梔子中的含量很低，约为0.005%〜0.01%,主要是以其前体形式京尼平昔形式存在,含量约为3%〜5%。因此，利用微生物与中药梔子共发酵生产京尼平具有非常重要的意义。微生物转化梔子的原理即利用B葡萄糖昔酶的产生菌与梔子进行共发酵，在B葡萄糖昔酶的作用下，使京尼平昔的糖昔键断裂而生成京尼平。本文利用一株产B葡萄糖昔酶的青霉Penic订liumnigricans与梔子共发酵，确立了发酵最优条件，进行了发酵动力学的研究，阐明了发酵过程中酶活变化与京尼平昔转化的关系，分离纯化了产物，并对产物进

7、行了性质和结构鉴定。1材料与方法1.1材料菌种为本实验室从自然界分离得到，经鉴定为一株黑青霉Penicilliumnigricans,编号为MKT。梔子果实购于成都同仁堂药店。京尼平购自安徽DELTA天然有机化合物信息中心。薄层色谱预制板硅胶G（福山生化试剂厂），其余试剂均为市售分析纯。GBRT全自控10L发酵罐（烟台高新区海洋生物工程研究所）,HQ45型恒温摇床（武汉中科科仪技术发展有限责任公司），ShimadzuLC1OAT高效液相色谱仪，Tu1800紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），BioTOFIIIQ型质谱仪,Bru

8、kerAvance600型核磁共振仪，XT4显微熔点测定仪，BioRad,FTS175傅立叶红外分光光度计（美国伯乐公司产品）。1.2方法1.2.1菌种筛选以及鉴定