基因治疗载体研究现状及前景1

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1、【关键词】基因;治疗;载休基因治疗是一种新的治疗手段，可用于零种疾病的治疗，包括癌症、遗传性疾病、感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病等.基因治疗通常是指将遗传物质（D0或RQ）引入到患者的细胞中.以达到治疗疾病的目的的方法［1~3］•它是伴随着DA重组技术的成熟而发展起來的新型的分子学治疗手段，是当今生物医学发展中的亜大突彼.1968年，美国科学家迈克尔•布莱泽首次在医学界提出了基因治疗的概念・1990年，美国科学家Anderson等进行了首例真正总义上的基因治疗临床试验，获得了初步成功［4］・在基因治疗过程中，基因导入系统是最关锚的技术・II询，在基因导入载体方面出现了两大主

2、流•即病毒载体系统及非橋毒载体系统•木文对基因治疗载体应用的原理、种类利研究现状进行了综述.1病禅载体外源基因进入细胞中通常需耍运输工具，而病毎是在漫长的H然进化过程中存活卞來的无细胞结构的最小、最简单的生命崙生形式.病毒通常可以高效率地进入特定的细胞，茨达自身蛋白，产生新的病诲粒子，因此被改造的病毒首先成为了基因治疗的我体•擒毒城体在基因治疗领域的应用广泛，约70%的治疗方案采用病毒载体［5,6］•病毒载体包括反转录病毒载体.腺病毒载体.腺相关病毒载体及单纯疱疹病無载体等.1.1反转录病毒载体反转录病毒届于正链RM病毒，可高效地感染许多类型的宿主细胞,并可稳定地整合到宿主细胞基因组

3、中，是般先被改造且应川最广泛的基因治疗载体•反转录病毒基因组长度约为lOkb,含有3个最亀耍的基因，H

4、lgag（编码核心蛋白〉，pol（编码反转录悔〉，env（編码摘毒外膜蛋白）•基因排列顺序是5’gagpolenv3’,两端存在长末端重复区（LTRS）•用于介导病毒的整合，eiw基因中含有病毒包装所必需的序列•另外，一些反转录病毒中存在原癌基因，其突变会引发癌变，当被整合到宿主细胞的獗癌基因附近或插入到宿主细胞的抑癌基因中时也可引发癌变.构建反转录橋诲载体名采用鼠白血病病毒（MoMLV）,取为嗜双性病毎，既可感染鼠细胞，亦可感染人细胞•反转录病毒载体的尿木成分包括：1〉必需的犒毒

5、尿因组分，如LTRS.病毒的包装识别信号.翻详所需的剪接识别位点及poly（A）尾等;2）高效的治疗基因.如抑癌基因及H杀基因等：3）标记基因，用于筛选;4）其他质粒必耍成分.在应用上.携带外源目的基因的反转录病毎技体册耍包装细胞（如ProPak及PA317细胞系〉才能成为成熟的重组假病毒粒子，苴原因为在构建的复制缺陷空反转录嘉毒载体中，外源II的基因取代了病毒的必需基因，此时屈毒只有借助包装细胞捉供的反式作用蛋白，才能包装产生子代重组病谁.这种子代重组病薄仅具备一次感染性，避免了在人体细胞间扩散感染，亦降低了橋毒木身的致癌性及致病性.作为基因治疗栽体，反转录病弗栽体具冇感染率高，可

6、稳定整合表达，宿主范围广泛及对宿主毒性小等优点，但同时也存在仅感染正在分裂的细胞.可能致悠及包装外源DNA小（＜8kb）等缺陷•目前•在基础与临床研究中此类病诉技体名适用于间褛体内基因治疗.特别是肿瘤的基因治疗•但重组反转录橋毒的感染和转导效率较低，外源基因随机插入，可能导致究变•慢擒毒载体是以人类免疫缺陷I型嘉毒（HIV1〉为基础发展起來的基因治疗载体，区别于一般的反转录屈毒载体，対分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，转移基因片段容量较大，转染所需的病奇滴度可达（1-10）7XMU/L,目的基因表达时间长，不易诱发宿主免疫反应，对淋巴细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞、肌细胞和多种肿

7、瘤细胞具有较髙的转导效率［7〜10］・1・2腺病诉载体腺病毒是无包膜的线性双链DM病逝,在H然界分布广泛.至少存在100种以上的血淸熨.腺病毒菲因组长度约为36kb・两端各有1个反向末端重复区,其内侧为柄毒包装信号.腺插毒基因组上分布着4个早期转录元（ELE2,E3.E4）承担调节功能,和］个晚期转录元负责结构蛋白编码•作为基因治疗的载体，腺擒毒载体具有如下优点：1〉基因包装容眾较大，因而町插入大片段外源基因，报名可达35kb：2）感染效率高，可高效地转导不同类型的人组织细胞，体外实验转导效率接近100%转导效率；3）可转导非分裂细胞；”）在细胞培养物中冇高滴度的朿纟n橋毒产缺5）进

8、入细胞内并不整合到宿主细胞呈囚组.仅瞬间表达.因而安全性较麻第一代腺橋毎栽体为E1或E3基因缺失，缺失区插入外源治疗基因.但此型载体可引发机体产生强烈的炎症反应或免疫反应，且表达外源基因的时间较短.第二代腺病毒我体则另外让E2a或E4基因缺失，产生较霸的免疫反应，在戦体容昴和安全性方面亦有较大改进•第三代腺病毒找体缺失了全部的（无病毒载体）或大部分腺橋毒基因（微世腺病毒载体），仅保昭反向末端蛍复区和包装信廿用列，嚴多M插入35kb的基因，且所引起的细胞免疫