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时间:2019-10-16
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1、7‘7908本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:j冱雎日期:-7..OLO、r∥37:jY》℃£苏州大学学位论文使用授权声明lI(E[IIIlllIIIIrlrIfIY1731409本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,学位论文著作权归属苏州大
2、学。本学位论文电子文档的内容和纸文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年一月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名:逾丝拿日导师签名:隆毽日中文摘要抑制作用及其机制细胞株增殖和凋亡的影响,.0ug/ml、3.0I.tg/m1)的CD40L镜观察细胞生长情
3、况,MTT比色法测定计算各实验组和对照组细胞的生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测CD40L对HCT.116细胞周期和细胞凋亡的影响,RT-PCR半定量法检测VEGF、bcl.2及fasmRNA的表达水平,WestemBlot法测定肿瘤细胞中细胞内VEGF、Bcl.2及Fas蛋白的表达情况。结果:(1)MTT法显示一定浓度的CD40L可抑制HCT.116细胞增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性,实验组与对照组及各实验组之间比较均有统计学意义(胙0.05)。(2)FCM结果显示,HCT.116经CD40L作用48小时后,细胞有明显凋亡,且随浓度的增加和
4、作用时间延长而增强,G2/M期细胞比例上升,Go/G1期细胞比例下降,呈剂量依赖性(正0.05)。(3)RT.PCR法显示,HCT—l16细胞的fasmRNA随CD40L浓度增加而表达增加,VEGF、bcl.2mRNA随药物浓度增加表达下降(西0.05)。(4)WesternBlot法结果显示,随着不同浓度的CD40L处理48h后,HCT.116细胞中VEGF、Bcl.2蛋白表达下降,Fas蛋白表达升高(卿.05)。结论:(1)CD40L可以抑制体外培养的人结肠癌HCT.116细胞生长,具有时间和剂量依赖性,将细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋
5、亡。(2)CD40L对HCT.116细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与上调Fas基因转录和蛋白表达,下调VEGF、Bcl.2基因转录和蛋白表达有关。关键词:CD40L;结肠癌;细胞凋亡;Fas;Bcl.2;VEGF作者:汤世军指导老师:汪良英文摘要CD40L对人结肠癌细胞HCT-116生长抑制作用及其机制的实验研究ThestudyofgrowthinhibitoryeffectanditsmechanismsofCD40LonhumancoloncancercelllineHCT.116AbstractObjective:Tostudytheant
6、i—tumoreffectanditsmechanismsofCD40LonhumancoloncarcinomacelllineHCT.116invitro.Methods:Invitro,exponentialphasehumancoloncarcinomacelllineHCT-I16wastreatedbyCD40Lindifferentconcentrations(0.1ug/ml,0.5ug/ml,1.0Ug/ml,2.0ug/ml,3.0I.tg/m1).CellmorphologychangesWasobservedbyoptic
7、almicroscopy.BymeansofMTTassay,theabsorbancevalueWasdetectedandinhibitionratewascalculate;cellcyclesandapoptosiswereanalyzedbyflowcytometry(FCM);themRNAexpressionsofVEGF、bcl-2、faswereanalyzedbyreversetranscriplasepolymerasechainreaction(RT—PCR);Immunohistochemistrywasusedtode
8、tectVEGF、Bcl一2、Fasproteinexpression.Results:(1)MTI"assayindicatedtha
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