c1c-3蛋白及血管平滑肌细胞容积调节性氯通道关系及其对ca- 272 2b-运动影响

《c1c-3蛋白及血管平滑肌细胞容积调节性氯通道关系及其对ca- 272 2b-运动影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、CIC一3盘fl’J帆管、卜滑舭细胞靠极蹦箝朴氯通道的天不及jI对cd’延功的蟛响中文摘美激活的】cl。l和If}．fl(。亦无明显影响。小结1A10细胞存在容积凋节性氯通道。2A10细胞有内源性CtC-3蛋白表达，gpClC一3cDNA转染后细胞CIC一3蛋白表达明显增加，同时细胞容积调节性氯电流增强。低渗激活的CIC．3氯通道电流的生物物理学和药理学特性与A10细胞低渗溶液激活的氯电流相同。3C1C．3反义寡核苷酸抑制CIC一3蛋白表达晌同时办显著抑制A10细胞内源性容积调节性氯电流。胞内透析抗CI

2、C．3抗体可完全取消低渗激活的CIC．3氯通道和A10细胞内源性容积调节性氯通道电流。4PKC和蛋白酪氨酸磷酸化信号通路参与调控CIC一3氯通道和A10细胞内源性容积调节氯通道的开放，且对两者的作用无差异。以上结果提示，在A10血管平滑肌细胞上C1C．3氯通道参与了细胞容积调节功能，是容积调节性氯通道的分子基础。第二部分AIO细胞a，肾上腺素受体激活的Ca2+内流通路及不同Ca2+通道阻断剂的作用采用thapsigargin(TG)激发SOCCca2+内流及SOCC电流，以phcnylep¨ne(Phe

3、)触发ROCCCa”内流及ROCC电流。应用Fura．2荧光探针测定A10细胞上ROCC和SOCCCa2+内流和膜片钳全细胞记录技术记录ROCC和SOCC电流，以探讨A10细胞上受体激活引起的ca2+内流通路以及三七皂甙单体Rd对它们的作用。结果表明：1Ca2+池ca2+泵抑制剂TG和o1．肾上腺素受体激动剂苯肾上腺素(Phe)均可引起【Ca2+】j升高。当保持电位为，60mV时，TG在A10细胞可激活一内向电流，该电流可被三价阳离子Gd”和细胞外0Na+／0ca2+溶液所抑制。与TG作用相似，保持电位

4、为．60mV时，Phc在A10细胞亦可激活一内向电流，该电流可被d．．肾上腺素受体拮抗剂酚妥拉明和三价阳离子Gd3+以及细胞外0Na+／0ca2+溶液所VCIC．3蛋臼’。l由管、卜滑帆细艇容根渊锚忭氯通道的天系及}￡WCa。运动的蟛啪中文摘费抑制。证实A10细胞上存在有SOCC和ROCC。2在无Ca2+BSS缓冲液中，lumot．L。TG通过耗竭胞内Ca-"+池引起胞浆Ca2+瞬时性列i笥，随后：flIl入10um01．L。Phe-未见[Ca”l进一步变化。但在缓冲液中含1．5mmo】．L。Ca2+和

5、l“m01．L。nifedipine的条件。F，Iut001．L。TG作用达平台后再加入10um01．L。Phe仍可进‘一步引起ca”内流。膜片钳的结果显示，在lum01．L。TG激活SOCC电流的基础上加入10tJm01．L。Phe仍能进。步激活一内向电流。随后加入1um01．L。a。．肾上腺素受体拈抗剂酚妥拉明可完全抑制Phe激活的内向电流。提示此基础上Phe弓I起Ca”内流和内向电流是a，一’肾上腺素受体激动后通过不依赖于SOCC通路所引起。3Nifedipine对SOCC和ROCC电流无影响。2

6、．5-40lam01．L4SK&F96365呈浓度依赖性地抑制lktm01．L。TG和l0um01．L。Phe激活的SOCC和ROCC电流。2．5．40um01．LoSK&F96365对SOCC电流的抑制率分别为13．O±4．4％、35．5±8．5％、56．9±7．6％、76．4±8．O％和76．5±7．7％：对ROCC电流的抑制率分别为16．9±6-2％、40．9±4．6％、61，1±9．3％、79．1±5．4％和79．7±5．6％。SK&F96365对SOCC和ROCC电流的最大抑制浓度为20Hmo

7、l，L～，各浓度点对sOCC和ROCC电流的抑制作用无差异。5．80pt001．L。人参皂甙．Rd呈浓度依赖性地抑制lpt001．L-1TG和lOHm01．L。1Phe激活的SOCC和ROCC电流。5．80正m01．Lo人参皂甙．Rd对SOCC电流的抑制率分别为8．3±3．3％、19．9±6．1％、32．6±7．7％、39．8±6．9％和38．2±8．6％；对ROCC电流的抑制率分别为14．2±4．8％、44．5±9．O％、65．0±11．3％、79．6±10．70／o$n80．O±11．3％。人参皂甙

8、．Rd对SOCC和ROCC电流的最大抑制浓度为40lam01．L～，Rd对ROCC的抑制作用在10．80um01．L。各浓度点均显著高于对SOCC的抑制作用。小结1A10细胞存在有ROCC和SOCC。2A10细胞上a。一肾上腺素受体激活引起的Ca2+内流中包含非Ca2+池操纵性Ca2+内流途径。3SK&F96365和人参皂甙一Rd均能浓度依赖性抑制Phe和TG激活的ROCCVlCIC一3监[J1』帆管、卜滑肌细胞容积训节性氯通道的芙系占乏j