bmps蛋白对烫伤创面愈合及疤痕疙瘩的形成影响

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。作者签名：』堑日期：丑年上月堑日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位

2、论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。储躲互塑翩签名争丝吼珥年上月碰日硬士学位论文引言第一章疤痕疙瘩组织中酬P一2“的分布及表达0引言疤痕疙瘩是临床上常见的病理性疤痕，具有不断浸润生长的特性，手术治疗后复发率极高。其形成机制目前尚不清楚，可能与细胞因子、细胞凋亡、细胞外基质及角质形成细胞等有关。深度烧伤创面愈合后疤痕遗留问题是烧伤治疗的主要难题。如何使烧伤病人创面早期愈合并减少或避免疤痕遗留一直是人们关心的问题。近年来，骨形态生成蛋白(BMPs)及受体在创伤愈合中的作用逐渐被学者研究并阐述。它是一种多功能生长因子

3、，最初fljUrisdl】等从骨组织分离出来，对其研究主要限于诱导骨、软骨的形成及促进成骨细胞生长等。BMPs属于TGF．B超家族成员，目前探知至少20种亚型分子圆。其成员在结构上相似，但其功能在不同时期、不同阶段有着极大的差异。BMPs是重要的背一腹化发育促进因子，几乎胚胎发育的关键步骤都受到了BMPs的调控【3】。BMPs家族的成员都通过结合两种丝氨酸，苏氨酸激酶受体(即BMPI型、II型受体)发挥作用，I型、II型受体与配体结合形成异聚体，从而将BMPs信号传递给下游作用物。近年来，BMPs信号传导方面的研究取得了许多新的

4、进展14,卯，特别是在BMPs受体的生物学特性和作用机制方面有较大突破；近期国外有研究表明其有诱导干细胞向腱细胞[61、表皮细胞【7，叼等多种细胞分化可能。许多研究证明B醐Ps及受体与创伤愈合机制、疤痕形成关系密切，参与表皮细胞和间质细胞的分化和生长。KaiserS唧认为过量表达BMP-6延迟伤口愈合及疤痕形成；WankellMIlo】向创口注入BMPs拮抗剂foUistatin，发现疤痕明显减少，但伤口延期愈合；EunAHwangI“1发现在胎儿无疤痕愈合过程中，BMPs及受体均呈低水平表达；StdrdckiI珏)应用外源性B

5、MP-2使胎儿伤口疤痕形成，表皮及真皮增厚，并刺激体外培养的成纤维细胞生长。他们的研究都提示BMPs可能参与了刨伤愈合、疤痕形成的调控。疤痕疙瘩中BMPs表达情况如何国内外尚没有相关报道。BMP02，4是此类蛋白中活性较强的两个，并广泛表达于全身多种器官及组织表面，与受体及拮抗剂相互作用。笔者通过研究BMP．2／4在正常皮肤和增生性疤痕、疤痕疙瘩组织中的分布及其表达，意在揭示BMPs在疤痕形成机制的可能作用。硕士学位论文瓷料与方法1资料和方法1．1标本收集实验所用疤痕疙瘩、增生性疤痕及正常皮肤组织各6份均来源于湘雅医院烧伤整形外

6、科临床手术切除后。6份疤痕疙瘩组织中肩部2份、胸部3份、耳垂部1份，病程为1．0～1．5年，未曾应用药物治疗及放射治疗。6份增生性疤痕组织中颈部1份、面部3份、上肢2份，病程为0．5～1．0年。6份正常皮肤组织中肩背部2份、胸部2份、腹部2份。1．2试剂与仪器HumanBMP-2，4AffinityPurifiedPolyclonalAb．R&DSystems，lnc．SP-9003羊SPKitAh．京中杉公司DAB显色试剂盒，晶美生物工程有限公司O．01moFL磷酸缓冲液(PBS，pH7．3)4％多聚甲醛倒置相差显微镜，Oly

7、mpus，Japaa石蜡切片机微波加热器生物光学显微镜照相机}腿～S．2000高清晰彩色医学图文分析系统1．3实验方法1．3．1包埋及切片将组织标本置于4"C、O．01moFL磷酸缓冲液(PBS，pH7．3)中洗去血液，用手术刀片将组织块修成1．0cmxl．0crux0．5cm大小。迅速置于体积10倍以上体积分数4％多聚甲醛中固定，于4"C下过夜。石蜡包埋，10tim连续切片。13．2免疫组化采用过氧化酶标记的链霉卵白素(SP)法对连续切片进行免疫组织化学染色。2硕士学位论文资料与方法严格按北京中杉公司试剂盒说明书操作，二氨基联

8、苯胺(DAB)显色。BMP-2／4抗体工作浓度1：100，羊抗人二抗工作浓度1：100。阴性对照组用PBS代替第一抗体。．于显微镜下观察染色结果，阳性反应部位呈棕黄色，细胞呈淡蓝色。免疫组化步骤：T蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，柠檬酸微波修复3％H202灭活内源