【精品】生化分析试题

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1、1、简述盐析的定义、原理及应用定义：增加中性盐浓度使蛋白质、气体.未带电分子溶解度降低的现象。是蛋白质分离纯化中经常使用的方法，最常用的中性盐有硫酸鞍、硫酸钠和氯化钠等。原理：加入某种电解质盐析剂，这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强，它使溶液中口由水分子数减小，从而提高溶液中欲结晶物质在溶液屮的有效浓度，使欲结晶物质在溶液屮结晶析出。应用：胶体凝聚如豆腐的制作，乙酸乙酯等的提纯萃取及浓缩，生物大分析试样的粗制2、简述透析的基本操作.注意事项及应用基本操作：将待分离或纯化样品封入由半透膜组成的透析袋里，然后将袋子放入低离子强度的透析液中，此时袋内分子量小于透析袋截留分子量

2、的分子可通过膜进入透析液，从而实现大分了与小分了物质的分离。注意事项：透析过程实现平衡大约需要4〜6h因此通常应在4比左右进行，并需进行搅拌，勤换透析液或采用较大量透析液可加速该过程。应用：大分了样品中去除盐类及其它小分了（如有机溶剂等）；去除与大分了结合较弱的小分子或离子（透析液中加入适量螯合剂可加快该过程）；利用透析平衡可以测定大分子（蛋口质或核酸）与小分子间的结合常数。试样浓缩：可直接用吸收剂（聚乙二醇）吸收3、简述速率区带离心法与等密度离心法的操作及应用速率区带离心法：离心前在离心管内先装入密度梯度介质，将待分离样品轻轻铺在密度梯度介质的液面上，与其一起离心。由于待分离的粒子在梯度

3、液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成-系列区带，达到彼此分离的目的。该方法屈不完全沉降。离心时间过长，所有的样甜可全部到达离心管底部；离心时间不足，样品述没有分离。受沉降受物质本身大小影响较大，一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。等密度离心法.与速率区带离心法类似，区别在于所使用的密度梯度介质的配制，该法中的密度梯度区间必须包含被分离样品中所有粒了的密度。在足够转速及时间的条件下，粒子稳定地处于梯度介质屮密度与其相等区域，从而实现分离。粒子形成纯组分的区带，与样品粒子的密度有关，而与粒子的大小和其他参数无关，因此只要转速、温度不变，则延长离心时间也不

4、能改变这些粒子的成带位置。4、简述电泳的基本原理及影响因素电泳的基本原理：生物大分子如蛋白质，核酸，多糖等大多都冇阳离子和阴离子基团，称为两性离子•常以颗粒分散在溶液中，它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用•在电场屮，带电颗粒向阴极或阳极迁移，迁移的方向取决于它们带电的符号，这种迁移现象即所谓电泳.影响因素:电泳介质的pH值，缓冲液的离子强度，电场强度，电渗现象。5、简述聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的原理原理:SDS（十二烷基磺酸钠）可破环蛋口的高级结构（变性），并按1.4：1（w/w）的固定比例与变性后的蛋白结合，而且SDS携带的大量负电荷完全将蛋白自身电荷屏蔽

5、，复合物均带负电荷，此时复合物的迁移速率不再决定于蛋口质的荷电性质，而完全决定于蛋白质的分子量（体积）。体积越大，移动的阻力越大，反之越小（与凝胶排阻层析不同，凝胶电泳无外水体积），分子量的对数与电泳迁移率成线形关系（已知分了量的标准蛋口做标准曲线）6、空间排阻色谱存在外水相7、低温保存、一定的保存期限、尽量以干粉形式保存8、CH2-一chcoo]1、酪氨酸*nh3CH2—CHCOO"色氨酸9、蛋片质的一级结构：包括组成蛋白质的多肽链数目，多肽链的氨基酸顺序以及多肽链内或链间二硫键的数目和位置。蛋白质的二级结构：指蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链原子的相对空问位置，但并

6、不涉及氨基酸残基侧链的构象。蛋白质的三级结构：指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位直，即肽链中所有原子在三维空间的排布位置，三维构象从根木上还是决定于一级结构。蛋口质的四级结构：蛋口质中不同种类和数冃的亚基在空间的排布及亚基之间接触部位的布局和相直作用。10、犬然蛋白质分子在外界因索的作川下，由紧密有序的结构变成松散无序的结构，并使得蛋白质的物理（溶解度、旋光性、吸收光谱）、化学性质（水解速度、反应能力等）及生物活性（如酶的活性等）发牛变化的现象称为变性。变性只涉及次级键和二硫键的断裂,一般不涉及一级结构的变化。因素包括：热变性：50-60°C以上，多为凝聚和沉淀的不可逆变性酸碱变性：p

7、H4〜10（等电点附近）稳定尿素和盐酸呱：浓度6molL-1时，二、三、四结构完全丧失，其至发生凝聚和沉淀现象表面活性剂其它因素：冇机试剂、盐、超声波11.简述凯氏定氮法测定蛋口质含就的原理答：样品与硫酸一同加热消化，分解冇机质，释放出的NII3与硫酸结介成硫酸钱留在溶液屮。在定氮消化瓶中，用氢氧化钠中和硫酸後生成氢氧化钱，加热乂分解NH3，用硼酸吸收，用标定过的盐酸或硫酸滴定,从而计算出总氮量，换算为蛋白质量。12.除