两种方法分离小鼠脾原始T淋巴细胞效果比较

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1、·540·ChinaTropicalMedicineMay2013Vol.13No.5中国热带医学2013年第13卷第5期·论著·两种方法分离小鼠脾原始T淋巴细胞效果比较*陈嵘祎，阿彩岭，周英，樊翌明摘要：目的比较Ficoll-Paque梯度离心法与免疫磁珠法分离T淋巴细胞的效果差异，筛选有效的、优异的分选小鼠脾原始T淋巴细胞方法。方法分别采用Ficoll-Paque梯度离心法及MiltenyiBiotec免疫磁珠进行小鼠淋巴细胞分离。血小板计数器统计单核淋巴细胞数，苔盼蓝染色判断细胞存活率，流式细胞术鉴定CD4+CD62

2、+T淋巴细胞纯度，并进行统计学分析。结果免疫磁珠法CD4+CD62+T淋巴细胞纯度较高为（66.27±3.52）%，Ficoll-Paque梯度离心法细胞纯度为（15.27±4.16）%，两者比较差异有统计学意义（P<0.01）；但Ficoll-Paque梯度离心法获取淋巴细胞数（1.47±0.35）×108较免疫磁珠法的（0.67±0.26）×108多，两者比较差异有统计学意义（t=8.199，P<0.01），且Ficoll-Paque梯度离心法细胞存活率（93.9±2.6）%较免疫磁珠法的（89.9±2.9）%高，两者

3、比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。结论免疫磁珠法适合分离小鼠脾原始T淋巴细胞并用于细胞纯度要求高的免疫学实验，但细胞得率需进一步优化。关键词：鼠；免疫磁珠；淋巴细胞分离；梯度离心中图分类号：R332文献标识码：A文章编号：1009-9727（2013）5-540-04ComparisonofisolationofprimaryspleencellsinmicebyusingFicoll-Paquegradientcntrifugationandimmunomagneticbead.CHENRong-yi，ACai-l

4、ing，ZHOUYing，etal.（AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege，Zhanjiang524023，Guangdong，P.R.China；Correspondingauthor:FANYi-ming，Ymfan1963@163.com）Abstract：ObjectiveTocomparetheeffectofisolationofT-lymphocyteofmicebyFicoll-Paquegradientcentrifugationandimmunomagn

5、eticbeadmethod.MethodsFicoll-PaquegradientcentrifugationandMiltenyiBiotecimmunemagneticbeadswereusedforisolationofTlymphocyteinmice.Cellnumberwerecalculatedbyplateletcounter，cellsurvivalratewasjudgedbytrypanbluedyeing，CD4+CD62L+Tlymphocytepuritywasdetectedbyflowcy

6、tometry.ResultsThepurityofCD4+CD62L+Tlymphocyteintheimmunemagneticbeadmethodgroupwashigher（66.27±3.52%），andlowerinFicoll-Paquegradientcentrifugationgroup（15.27±4.16%），showingsignificantdifference（P<0.01），butlymphocytecountinFicoll-Paquegradientcentrifugationgroup（

7、1.47±0.35×108）wasmorethanimmunemagneticbeadgoup（0.67±0.26×108）showingsignificantdifference（t=8.199，P<0.001）.Inaddition，thecellsurvivalrateinFicoll-Paquegradientcentrifugationgroup（93.9±2.6%）washigherthanimmunomagneticbeadgroup（89.9±2.9%）alsoshowingsignificantdiffe

8、rence（P<0.05）.ConclusionsImmunomagneticbeadmethodissuitableforcellpuritydemandingimmunologicalexperimentonconditionthatfurtheroptimizationofthecellyield