_自组装白蛋白纳米粒的制备及体外释药行为

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1、第12卷第4期中国药剂学杂志Vol.12No.42014年7月ChineseJournalofPharmaceuticsJuly.2014p.115文章编号：（2014）04–0115–08自组装白蛋白纳米粒的制备及体外释药行为王志昆，张欢，孙晓岩，王东凯*(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016)摘要：目的以紫杉醇为难溶性药物模型，制备自组装紫杉醇白蛋白纳米粒。方法谷胱甘肽作为还原剂，经细胞超声制备白蛋白纳米粒，通过正交试验筛选出最优处方。结果结果表明BSA-1浓度为1.5g•L，谷胱甘肽用量为90mg，紫杉醇/白蛋白质量比为1:20时，可以制备出表面圆整，粒径为91

2、.19nm，zeta电位-12.8mv，包封率为90.8%，载药量为4.5%的紫杉醇白蛋白纳米粒，体外药物释放符合peppas模型，n=0.29，主要以扩散释药为主。结论自组装法制备出的白蛋白纳米粒粒径均一可控，并可显著提高白蛋白对难溶性药物的包封率。关键词：药剂学；白蛋白纳米粒；自组装；紫杉醇；粒径中图分类号:R943文献标志码：A蛋白质具有无毒、生物相容性好、可降解等特点，因而备受科研工作者们的青睐。从来源上常用的有2种，即植物蛋白和动物蛋白。其中，又以人血清白蛋白和牛血清白蛋白作为药物载体应用的最为广泛。2005年，由FDA批准上市的用于治疗乳腺癌的Abraxane

3、®，就是以人血清白蛋白包载紫杉醇研制成功的纳米制剂，其毒性小、使用方便、靶向性强，治疗效果远远优于传统的Taxol®。基于此研发出的多西紫杉醇、雷帕霉素、烯丙基氨基格尔德霉素的白蛋白纳米制剂也已进入临床研[1]究。[2]常见的白蛋白纳米粒制备方法为去溶剂化法和乳化超声法2种，前者应用于难溶性药物包封率极低，后者则因制备出的粒径较大，且油相极难除去而受到限制。为解决上述问题，本文作者选用了来源广泛、价格便宜的牛血清白蛋白作为难溶性药物载体，以安全无毒的谷胱甘肽作还原剂，诱发白蛋白自组装形成白蛋白纳米粒，再经细胞超声粉碎进一步控制和减小粒径。此种方法不仅可以控制粒径在几百纳米

4、以下，而且可以有效提高难溶性药物的包封率。制备过程中无需使用有毒的溶剂如二氯甲烷、氯仿等，仅使用少量乙醇。另外，纳米粒表面保留了丰富的游离氨基，有利于对纳米粒表面进行进一步的修饰（例如聚乙二醇化、叶酸修饰等）以提高制剂的靶向性，因此本方法具有广泛的应用前景。1仪器与材料BS110S型精密电子天平（北京Sartorius仪器系统有限公司），PB-10Sartorius普及型pH计（德国Sartorius股份公司），ZetasizerNanoZS90粒度测定仪（英国Malvern公司），PF-101T集热式恒温磁力搅拌器（巩义市英峪予华仪器厂），TGL-16G台式高速离心机（

5、上海医用分析仪器厂），收稿日期：2014–03–21作者简介:王志昆(1988–)，女(汉族)，黑龙江牡丹江人，硕士研究生，E–mailzhikunmishu@163.com；*通讯作者：王东凯(1962–),男(汉族)，辽宁沈阳人，教授，博士，博士生导师，主要从事药物新剂型的研究,Tel.024-23986310,E–mailwangycsyphu@126.com。116中国药剂学杂志第12卷JEM-100B透射电镜（日本JEOL公司），LC-10A高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）。紫杉醇原料药（武汉神曲生物化工有限公司，含量质量分数为99％，批号:12081

6、2），牛血清白蛋白（Ⅴ，安徽合肥Biosharp生物科技公司），透析袋（美国Viskase公司，截留相对分子质量:8000~14000），三硝基苯磺酸、氯化钠、乙醇（分析纯，市售），乙腈（色谱纯，市售）。2方法与结果2.1检测方法的建立2.2.1高效液相色谱法测定紫杉醇含量经紫外扫描，确定检测波长为227nm。经筛选优化，确立流动相组成及比例为V(乙腈)：-1V(水)=60:40，进样体积10μL，流速1.0mL•min，样品经0.22μm微孔滤膜过滤。该条件下，紫杉醇保留时间约8min，溶剂、白蛋白等对紫杉醇的测定无干扰，色谱图见图1。经方法学研究，紫杉-1-1醇在1.

7、09~54.4mg•L质量浓度内线性良好（A=38384ρ-386.27，r=0.9999）；低（1mg•L）、中-1-1（20mg•L）、高（50mg•L）3个质量浓度的平均回收率为100.1%，RSD为1.21%；日内精密度和日间精密度良好（RSD<2.0%）；溶液室温24h内的稳定性良好（RSD=1.99%）。上述结果表明建立的HPLC法适用于紫杉醇含量检测。ABA-BSA;B-PTX-BSA-NPsFig.1TheHPLCchromatograghsofBSAandPTX-BSA-NPs图1白蛋白和紫杉醇白蛋白纳米粒的