流式细胞分析

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1、流式细胞术胡嘉波江苏大学基础医学与医学技术学院1流式细胞仪（简称FCM）是一项集激光流式细胞仪（FlowCytometer简称）技术,电子物理技术，光电测量技术，技术，屯子物理技术,光电测量技术，计算机技术及细胞荧光化学技术，单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器.荧光化学技术，单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器.概括来说，概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的，的细胞或生物颗粒进行多参数的，快速的定量分析和分选的技术.从开始设想到第一台仪器的问世科技工作者进行的技术•从开

2、始设想到第一台仪器的问世，科技工作者进行了不懈的努力•随着各相关技术的迅速发展，了不懈的努力•随着各相关技术的迅速发展,FCM技术已技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的工具.经成为日益完善的细胞分析和分选的工具.2FCM仪器分为二大类:FCM仪器分为二大类仪器分为二大类：一类为台式机，其特点为:仪器的光路调节系统固定，一类为台式机，其特点为:仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握.BD公司的临床自动化程度高，操作简便，易学易掌握.BD公司的临床型FACScan也是最早可用于临床诊断的仪器.F

3、ACScan也是最早可用于临床诊断的仪器也是最早可用于临床诊断的仪器.另一类为大型机，其特点为可快速将所感兴趣的细胞分另一类为大型机，选出来，并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的选出来，培养孔或板上，同时可选配多种波长和类型的激光器，培养孔或板上，同时可选配多种波长和类型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究应用.适用于更广泛更灵活的科学研究应用.3•流式细胞仪实物BD-CaliburBDFACSVantage4其特点是：其特点是：①测量速度快，最快可在秒种内计测数万个细胞；测量速度快，最快可在1秒种内计测数

4、万个细胞秒种内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理，可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理，化学特性的多参数测量,并具有明显的统计学意义；化学特性的多参数测量,并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法,它综合了激光技术，是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术，计算机技术，流体力学，细胞化学，计算机技术，流体力学，细胞化学，图像技术等从多领域的知识和成果；领域的知识和成果；④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术.既是细胞分析技术,又是精确的分选技术.5概要说來,流式细胞

5、术主要包括了样品的液流概要说來，技术，细胞的分选和计数技术，技术，细胞的分选和计数技术,以及数据的采集和分析技术等.集和分析技术等.FCM目前发展的水平凝聚了目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果.半个世纪以来人们在这方面的心血和成果.6流式细胞仪发展的历史起源：1934年…细胞计数仪起源：1934年雏形：1949年…Coulter计数器雏形：1949年1959年1959年…B型Coulter计数器Coulter计数器1972年1972^:BD(Becton-Dickinson)Becton第一

6、台流式细胞仪，第一台流式细胞仪，具有分选功能7流式细胞仪主要由三部分组成：流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液流系统;光路系统以及电系统.其作用如下：流系统;光路系统以及电系统.其作用如下：液流系统：依次传送待测样本中的细胞到激液流系统：光照射区.光照射区.光路系统：细胞由激光激发，通过光学滤片光路系统：细胞由激光激发，产生光信号，并传送到相应的探测器.产生光信号，并传送到相应的探测器.电系统:把光信号转换为电信号.电系统:把光信号转换为电信号.8在流式细胞仪屮，细胞被传送到液流屮的激光照射区.在流式细胞仪屮，

7、细胞被传送到液流屮的激光照射区.任何存在于悬液屮的直径为0.2J50微米的粒子或细胞微米的粒子或细胞任何存在于悬液中的直径为都适用于流式分析.在实际工作中，都适用于流式分析.在实际工作中，用实体组织进行流式细胞分析往往是不可能的，式细胞分析往往是不可能的，分析之前必须对其进行分解.被液滴包绕的粒子称为细胞液柱，当粒子经过激光被液滴包绕的粒子称为细胞液柱，照射区时,通过激光激发产生散射光.照射区时，通过激光激发产生散射光•含有荧光的粒子就会表现出其荧光特性.散射光和荧光由光路系统（就会表现出其荧光特性.散射光和荧光

8、由光路系统（相应的透镜，滤片和探测器）收集.应的透镜，滤片和探测器）收集•分光器和滤光片引导散射光和荧光至相应的探测器，把光信号转换为电信号.散射光和荧光至相应的探测器，把光信号转换为电信号.910液流系统液流系统的作用是依次传送待测样本屮的细胞到激光照射区，液流系统的作用是依次传送待测样本屮的细胞到激光照射区，其理想状态是把细胞传送到激光束的中心.其理想状态是把细胞传送