【精品】普通遗传学大实验初步

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1、普通遗传学综合大实验安排：第一天上午：配置所需的试剂下午：1多倍体蚕豆诱导处理2孚尔根材料预处理3蚕豆有丝分裂临时片制作第二天上午：蚕豆根尖结构变异永久片制作下午：1多倍体蚕豆冲洗培养2蚕豆多倍体永久片制作弟二穴上午：花粉母细胞涂抹制片及观察下午：孚尔根反应临时片制作第四天上午：植物雄性不育系与花粉育性鉴定一实验方法与步骤二实验结果与收获三实验分析与体会（必须要自己写实验当中的心得与注意点）1制作理想植物根尖细胞临时片的关键2制作理想植物细胞永久片的关键3植物细胞核内DNA定性鉴定的关键4花粉母细胞涂抹制片的关键5植物雄性不育系与花粉育性鉴定的关键临时制片

2、的制作•:•取固定好的根尖水洗3次，把根尖放入洗净的小药瓶中，力Q10ml左右的1NHCL置入60°C水浴锅中水解8-12min,水解后取根尖分生区的全部（或部分）材料置于载玻片的中央，用另一载玻片呈“十”字型压片，再加醋酸洋红染色5-10mino盖上盖玻片，用吸水纸吸干多余的染液，镜检后，若有好的临时制片再做永久制片。永久制片的制作方法♦♦♦1脱盖玻片把临时片翻转，盖玻片朝下，放入盛有脱盖玻片液（1份45%冰醋酸+1份95%乙醇）的培养皿（编号①）中，将载玻甘的一端搁古短粗強璃棒丄，呈倾斜状，也盖破片百然滑落。誌玻片庇落后2~3min,分别取出盖应舟和载

3、玻片，用疲水纸吸干，注意不要触动载玻片上的材料。•2脱水、透明取三只培养皿，分别编号②、③、④，在其屮各放入一根II!黠懈禮序豔加ys加龄④号培养皿加正丁醇。操作时用鸭嘴银子把①号培养皿中已躍醸繁鐸载戳粽盖騎液鶴瓠鸚酸瞬在各编号培养皿中分别浸泡5miri左右。在整个脱水过程中，必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以免造成玻片上材料漂失。从④号培养皿屮取出载玻片和盖玻片置于滤纸上吸去多余的溶剂，在载玻片中央载有材料处滴上1〜2滴中性树胶，将盖玻片盖回原来位置进行封片。覆盖盖玻片时，要注意用鸭嘴银子夹住盖玻片，轻轻地倾斜覆盖，使之随着

4、树胶的扩展自然下滑,切不可施加压力或移动盖玻片。如发现封片中树胶有气泡，应让其自行逸出或用针尖烧热后烫一下，使气泡逸出。如树胶滴得过多溢出玻片四周，应待树胶晾干后，用脱脂棉蘸二甲苯轻轻擦净溢岀的树胶。封片后平放晾干，进行镜检，物象清晰符合要求的保存，并贴上标签，注明标木名称、作者姓名和制片日期。蚕豆多倍体诱导❖1将刚萌动的种子横放在培养皿中（有根的一面朝卞）然JnWA0.1%碱溶液，浸没根尖即奇。❖2在?5度温度下处理24小时后，充分洗净移入砂盘中o•:・3乳去蛊申培养2到3天后,将膨大的根尖切下，用卡诺国定液固定4—24小时o•:・4将固定好的根尖置入7

5、0%洒精屮，待下次实验时进行细胞学鉴定。•:「秋水仙碱是剧毒药品。实验完成后，一定要将手洗净，实验时，不得将食物带入室内脱氧核糖核酸（DNA）的测定❖一、实验目的学习掌握细胞核内DNA的鉴定方法-孚尔根染色法。❖二、实验材料蚕豆根尖二、实验步骤❖1取固定后的蚕豆根尖放入小药瓶中，在60°C1NHCL中水解5~12分，再放入冷1NHCL1分钟。❖2将1NHCL倒掉水洗3次后吸干，放入脱色碱性品红染色3-5小时。注意用黑纸包住药瓶，放在暗处。❖3倒掉染液，用S02溶液冲洗3次，每次1分钟。4倒掉S02液，加H20（切记不能把根尖暴露在空气中）o•5取根尖顶端（

6、染成紫红色的部分）。放在载玻片上，再用另一载玻片呈+字形庄卓分并滴上45%BtM液一滴。加盖并，用破tR纟魚包住压片。•场苗微镜下观察，选染色较深，细胞呈薄层分散的临时片，请老师当❖四、作业❖交理想的临时片。