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《脂氧合酶在胃癌中的表达及其意义（医学论文）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、脂氧合酶在胃癌中的表达及其意义作者：李建英，李勇，王小众，邹来玉，陈丰霖【摘要】目的检测5脂氧合酶(5lipoxygenase,5LOX)和15脂氧合酶1(15lipoxygenase1,15LOXl)mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并研究两者间的关系。方法采用RTPCR和westernblot检测胃癌组织及相匹配的癌旁正常组织中5LOX、15LOX1mRNA和蛋白的表达。结果5LOXmRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织(Pv0.05),而15LOX1mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织(P
2、<0.05)o5LOX与15LOX1在胃癌组织中的表达无明显相关(P>0.05)o结论胃癌组织中存在5LOX和15LOX1的表达失衡，且可能与胃癌的发生发展有关，但二者之间无相关性。【关键词】胃肿瘤；5LOX;15LOX1；逆转录聚合酶链反应；免疫印迹研究表明，多不饱和脂肪酸代谢与肿瘤的发生密切相关，各种脂氧合酶同工酶在其中具有不可忽视的作用,已逐渐成为我们治疗肿瘤的新靶点。近几年来，国内外研究人员对于脂氧合酶代谢途径在肿瘤发生过程中的作用已经进行了深入研究，5LOX和15LOX1是其中的关键酶。尽管5LOX已经被证实在多种肿瘤组织和细胞
3、系中表达升高，但在胃癌组织中的研究报道极少。在5LOX的促癌作用逐渐得到人们认同的同时，15LOX1在肿瘤发生过程中的作用仍未达成一致共识，在胃癌中的研究更是少见报道。因此，我们应用RTPCR和westernblot方法检测胃癌及癌旁正常组织中5LOX、15LOX1mRNA和蛋白表达，探讨二者在胃癌形成中的作用，为胃癌的有效治疗和预防提供新的思路。1材料与方法1.1材料收集30例2005年6月〜2006年1月间外科手术切除胃癌组织及距肿瘤边缘5cm癌旁正常胃黏膜组织（经病理证实）。液氮保存用于做RTPCR及westernblot研究。其中
4、女5例，男25例,平均年龄58.0岁。羊抗人5LOX多克隆抗体购于美SantaCruz公司（SC8885）,兔抗山羊二抗购于北京中山生物技术有限公司。绵羊抗人15LOX1多克隆抗体购于美国Cayman公司（160704）,兔抗绵羊二抗购于KPL公司。1.2方法1.2.1RTPCR检测RNA的提取按RNA提取试剂盒说明书规范操作提取组织总RNA,然后进行定量、检测纯度等。取RNA样品2^g,42°C60min,99°C5min合成cDNAo5LOX基因上游引物：上游引物5，CCCGGGGCATGGAGAGCA3J下游引物：5‘GCGGTGG
5、GGCAGCGTGTC3Z;416bpo15LOX1基因上游引物：5’GCTGGAAGAGAGAAGGAAGTTG3下游引物：5ZGAAGTCAGCTTCGAACAGTGTG3Z,485bpo内参卩actin基因上游引物：5CTATTGGCAACGAGCGGTTC37,下游引物：5zCTTAGGAGTGGGGGTGGCTT3Z,776bpo取lylcDNA进行PCR扩增（反应体系25
6、li1）o5LOX基因扩增条件：94°C3min,94°C30s,63°C30s,72°Clmin,32个循环；72°C7mino15LOX1基因扩增条件
7、：94°C3min,94°C45s,57°C45s,72°C1min,35个循环,72°C7mino取8卩1PCR产物，经1.2%琼脂糖凝胶（含0.5g/l漠化乙锭）电泳分离,紫外灯下观察结果。1.2.2westernblot检测将新鲜组织于冰盒上研磨，加入组织蛋白裂解液（1%NP4O,1%去氧胆酸钠，1%SDS,150mMNaCl,50mMTris,1Mg/m1亮肽素1eupeptin,l
8、ug/m1抑肽酶Aprotinin,l
9、Lig/ml抑肽素Pepstatin,0.1
10、Lig/ml苯甲基磺酸酰氟PMSF）1000nl,充分混匀。4
11、°C>12OOOg离心20min,收集上清。Bradford比色法测定蛋白浓度。每孔25昭蛋白上样,10%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。蛋白印迹包括电转膜、5%脱脂奶粉封闭、TEST稀释的一抗4°C过夜（5LOX、15LOX1抗体浓度分别为1:200、1:1000）、二抗（1:6000）室温轻摇60min,用化学发光试剂盒（北京中山生物技术有限公司）进行蛋白信号检测。Bactin作为内对照。1.3统计学处理采用SPSS11.0统计分析软件进行x2检验、SpearmanJs等级相关检验。P<0.05为有统计学差异。2结果2.15LOX和1
12、5LOX1mRNA在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达RTPCR产物电泳后观察，30例胃癌组织与癌旁正常组织中均可测到776bp的pactin,结果见表1、2,图1、2。1.25LOX和15LOX
