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时间:2019-10-12
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1、CFW处理对玉米大斑病菌生长发育的影响答辩人:张盼指导老师:马文奇教授谷守芹教授专业班级:环境科学0803班目的与意义材料与方法结果与分析结论与讨论致谢主要内容目的与意义玉米大斑病是玉米生产上的重要病害,危害十分严重,常造成严重的经济损失。目前对玉米大斑病的防治主要是利用抗病品种并辅以药剂防治,但由于该病菌变异频繁,品种抗性丧失较快,所用的化学杀菌剂防治效果较差,施药困难。因此研究病菌的发育和致病机理,寻找病害防治的新策略、新方法具有重要意义。研究发现,许多生物的生长发育均受到细胞信号转导途径的调控,如MA
2、PK、Ca2+及cAMP等信号转导途径。其中MAPK级联途径在生物体内占有非常重要的地位。在玉米大斑病菌中存在HOG1、FUS3/KSS1、Slt2三条MAPK级联途径,其中Slt2-MAPK途径又称为CWI-MAPK,热胁迫、低渗胁迫、氧胁迫、细胞壁抑制剂等均可以激活该条途径。CFW(Calcofluorwhite)即荧光增白剂为植物病原真菌Slt2-MAPK途径的特异性细胞壁抑制剂,常用于该条途径功能的研究。本研究拟通过CFW处理玉米大斑病菌野生型菌株,观察其对病菌生长速度、菌落形态、菌丝形态、分生孢子
3、产量的影响,进而初步明确玉米大斑病菌Slt2-MAPK级联途径的功能,为研究病菌生长发育和致病性的机制奠定基础。1供试菌株玉米大斑病菌野生型菌株01-232供试材料PDA培养基DMSO购自生工生物工程(上海)有限公司CFW(Calcofluorwhite)购自Sigma公司材料与方法3实验步骤3.1CFW的配制3.2CFW处理下病菌菌落形态的观察3.3CFW对病菌菌丝生长影响的测定3.4对突变菌株菌丝形态的显微观察3.5CFW处理下病菌产孢量测定结果与分析1.CFW对病菌生长速度的影响2.CFW对菌落形态的
4、影响0μg/mL25μg/mL50μg/mL75μg/mL100μg/mL0μg/mL25μg/mL50μg/mL75μg/mL100μg/mL0μg/mL25μg/mL50μg/mL75μg/mL100μg/mL3.CFW对菌丝形态的影响B:100μg/mLCFW处理A为CFW未处理对照;AB4.CFW对病菌分生孢子产量的影响结论与讨论本实验用不同浓度的CFW对玉米大斑病菌进行处理,在此基础上研究CFW对病菌生长发育的影响:(1)随着CFW浓度的升高,玉米大斑病菌的生长速率明显减小;(2)随着CFW浓度的
5、升高,菌丝则更加致密,低矮,呈辐射状生长,菌落边缘的新生菌丝颜色较浅;(3)随着CFW浓度的升高,菌丝细胞壁变薄,分隔不均匀,黑色素化程度低,且大部分菌丝干瘪,推测可能是由于细胞壁合成受阻从而细胞壁缺陷,部分内容物外泄所致;(4)当CFW处理之后,分生孢子产量下降,且随着CFW浓度的升高分生孢子的数目下降的程度越大。在玉米大斑病菌中,Slt2–MAPK级联途径调控病菌的细胞壁发育,而细胞壁的成分一直被用作新型抗菌药物的靶标,因此细胞壁抑制剂对病菌影响机制研究,为新型杀真菌剂的研究奠定基础。细胞壁抑制剂影响玉
6、米大斑病菌的生长速度、菌丝形态、分生孢子产量。但至于其转导途径还未清楚,因此在下步试验中,要利用Western、RT-PCR等试验手段来进一步研究CFW如何激活Slt2–MAPK级联途径。致谢感谢马文奇教授和谷守芹教授的悉心指导!感谢各位老师莅临指导!感谢各位师兄师姐以及一同实习的同学们的关心和照顾!
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