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1、目录293和293T293T细胞的培养心得293T细胞的培养与传代Jurcat细胞的传代悬浮细胞培养方法Jurcat细胞培养方法细胞名称293和293T种属人组织來源293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派主，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(P04)2转染效率可高达50%o蛋口表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过衣达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。形态特点上皮细胞
2、致瘤性+产物或抗原大T抗原染色体核型亚三倍体人细胞系。染色体众数为64,30%的细胞有64条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞der(l)t(l;15)(q42;ql3),der(19)t(3;19)(ql2;ql3),der(12)t(8;12)(q22;p⑶,还有四条标记染色体,有的细胞另有5条标记染色体。der(l)与M8(orXq+)常常成对岀现。N17与N22各有四条。值得注意的是多数细胞有三条X染色体，两条Xq+,—条Xp+o生长特性粘附/贴壁细胞文献评价293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad5
3、)DM的永生化细胞。[RF32725]表达转染的腺病毒5的基因。[RF32725]早期报道认为此细胞含有Ad5基因组左端和右端[RF32764],现已清楚仅含有左端序列。[RE50113]此细胞系人腺病毒滴度高。室温不贴壁，37°C儿日后重新贴壁。农达由整合索beta-1亚棊与玻基结合索受体alpha-v亚基组成的玻基结合索细胞表而受体.[RF33793]TheAd5insertwasclonedandsequeneed,cinditwasdeterminedthatacolineevrseqmentfromnts1to4344
4、isintegratedintochromosome19(19ql3.2).传代293:弃培养基,含0.25%胰酶,0.03%EDTA消化液洗涤,弃去,加l-2ml消化液室温或37°C消化。加入新鲜培养基，吸出，分到新培养皿中。一传二至一传四。293T:生长快,通常倍增时间不到一天。每3~4天1：10至1：20稀释,5%C02条件下培养。细胞贴壁疏松，可只用EDTA消化，不要川胰蛋口酶过度消化。培养基更换毎2-3天一次冻存液培养条件95%培养基;5%,DMSO；culturemedium95%;DMSO,5%；ATCC培养基:9
5、0%的MEMEagle,加入2mML-谷氨酰胺,1.5g/L碳酸氢钠,0.1mM必需氨基酸,1.0mM丙酮酸钠；10%加热灭活的马血清37°C培养293T细胞的培养心得点击次数：12发表于：2008-08-2423:25转载请注明来自丁香园来源：丁香园293T细胞差点被我养死，幸好我乂将它起死回牛:，一点心得。细胞传代：当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代，一传二，24小时后再传代。48小吋传就不好了，如果在24小吋后细胞没有长到80%,应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落。细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培
6、养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1rrd的PBS+EDTA(0.02%),來回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清)，混匀，不能吹打，分装2瓶，如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM,不分装。如果培养瓶屮的细胞贴壁较牢固，培养基上清没冇细胞脱落碎片，仇细胞氏满达到80%以上，吸走培养基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入1ml0.05%胰腮，37度消化不超过3min,细胞完全消化脱壁，取出加入10ml培养
7、基轻微吸打混匀，分装2瓶。培养基：MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+双抗293T细胞的培养与传代点击次数：24发表于：2008-08-2520:47转载请注明來自丁否园来源：丁香园293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒对以复制。大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回來的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿
8、到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已经冻死了，肯定没救了。但本着死马当活马医的想法在培养箱里放了一个星期，还是不见起色。正准备丢的时候，一次上网查293T细胞的特性时看到：“室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁”。如获至宋，赶紧跑到实验室
