MKP-5在糖脂混合毒性诱导小鼠胰岛β细胞凋亡及功能障碍中的作用及机制研究

《MKP-5在糖脂混合毒性诱导小鼠胰岛β细胞凋亡及功能障碍中的作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R34单位代码：10183研究生学号：2015772033密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）MKP-5在糖脂混合毒性诱导小鼠胰岛β细胞凋亡及功能障碍中的作用及机制研究TheroleandmechanismofMKP-5inglucolipotoxicityinducedapoptosisanddysfunctioninmousepancreaticβcells作者姓名：艾熙雷专业：再生医学研究方向：糖尿病分子机制研究指导教师：焦平副教授培养单位：药学院2018年5月MKP-5在糖脂混合毒性诱导小鼠胰岛

2、β细胞凋亡及功能障碍中的作用及机制研究TheroleandmechanismofMKP-5inglucolipotoxicityinducedapoptosisanddysfunctioninmousepancreaticβcells作者姓名：艾熙雷专业名称：再生医学指导教师：焦平学位类别：医学硕士答辩日期：2018年5月22日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出＜租、改编等有碍作者著作权的商业性

3、使用（但纯学术性使用不在此限）。。否则，应承担侵权的法律责任吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，。除文中已经注明引用的内容外本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期少阵纟月｜曰／｜中文摘要MKP-5在糖脂混合毒性诱导小鼠胰岛β细胞凋亡及功能障碍中的作用及机

4、制研究糖尿病是由环境与遗传两个主要因素长期共同作用引起的胰岛素分泌相对不足或胰岛素抵抗，并以持续性高血糖为特征性表现的自身代谢性疾病。主要包括I型糖尿病（Type1diabetesmellitus，T1DM）与II型糖尿病（Type2diabetesmellitus，T2DM），其中T2DM占糖尿病发病率的90%以上。T2DM患者体内糖代谢异常与脂代谢异常是并存的，并且糖毒性与脂毒性在T2DM的发生发展中并非孤立起作用，两者之间相互协同。研究表明，高血糖能够促进FFA诱导胰岛β细胞的凋亡。FFA能通过抑制胰岛素分泌，

5、降低葡萄糖利度等多种机制进一步增加血液中葡萄糖浓度，加重高血糖程度，从而构成糖脂混合毒性（glucolipotoxicity，GP）。丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activatedproteinkinases，MAPKs）广泛分布于各种动物体内，在细胞生长、发育、死亡等一系列生理活动中发挥重要作用，是调控生命活动重要的信号转导系统之一，在T2DM信号通路中充当重要角色。丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶（Mitogen-activatedproteinkinasephosphatases，MPKs）又称双特异性磷酸酶，

6、能够通过去磷酸化使MAPKs失活，这种负向调控调节作用，在细胞的应激、增殖、分化、凋亡等活动中发挥重要作用，其异常表达与糖尿病的发生、发展密切相关。MKP5是MKP家族成员之一，已有研究表明其在机体代谢及T2DM中发挥调节作用。然而，MKP5在GP诱导胰岛β细胞凋亡以及功能障碍中具体机制仍有待探明。本实验通过构建MKP5过表达小鼠MIN6细胞系，探讨MKP5在GP诱导小鼠胰岛β细胞凋亡、功能障碍中的作用及其潜在分子机制。实验目的：探讨MKP5在糖脂毒性诱导MIN6细胞凋亡、功能障碍中的作用及其潜在的分子机制。实验方法

7、：（1）MKP5过表达稳定细胞系构建与鉴定：取本实验已构建成功的IpcDNA3.1-MKP5质粒与pcDNA3.1空质粒对MIN6细胞进行转染。构建MKP5基因过表达的MIN6稳定细胞系（MIN6-MKP5）以及对照组细胞系（MIN6-PC），使用WesternBlot法对转染后的MIN6-PC、MIN6-MKP5两种细胞中MKP-5蛋白表达情况进行检验。（2）细胞增殖检测：糖脂毒性（33.3mM葡萄糖、0.4MmPA）作用MIN6-PC、MIN6-MKP5两种细胞24h后，使用CCK-8试剂检测MKP-5基因对MI

8、N6细胞增殖的影响。（3）细胞凋亡分析：A.糖脂毒性作用MIN6-PC、MIN6-MKP5两种细胞24h后，使用Hoechst33258染色法初步分析MKP-5基因在糖脂毒性诱导MIN6细胞凋亡中的影响。B.AnnexinV-FICT/PI双染法结合流式细胞仪分析糖脂毒性作用MIN6-PC、MIN6-MKP5两种细胞18h后的凋亡率。（4）Re