软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析

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1、论著・软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析雷子贤戚华兵苏楠赵子瑜陈锚锚何启芬赵玲金旻谢杨丽李福兵杜晓兰陈林中图分类号：R681.1文献标识码：A文章编号：1006-7108(2009)01-0009-07摘要：目的获得在软骨细胞中条件性敲除PTEN基因的FCFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析。方法通过P『EN条件性基因敲除小鼠(PteJw®小鼠)，与软骨细胞特异表达(^比重组酶的小鼠(Col2aCre)交配，获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠(Col2

2、aCre:Ptennox/flox);同时，利用Pten^小亂与FGFR3增强型点突变小鼠(Fgfr3碍一小鼠，即ACH小鼠)交配，子代杂合子小鼠(他严:ACII)之间再交配，获得Plen^0":ACH小鼠；通过Col2aCre：Ptcn"和脸芒如：ACH交配即可获得在软背细胞中特异性敲除PTEN茶因的FGFR3增强型点突变小fi((CoI2aCre：Plen^:ACH)O采用PCR对小鼠慕因型进行鉴定，免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率，通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析。结果获得了在软付细胞中敲除

3、PTEN的FGFR3点突变小鼠，免疫荧光染色证实Col2aCre：Ptcn*^^:ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低。初步的表型分析显示：Col2aCre：PlenWfl*：ACH小鼠身长、尾长均较PtenWDo1:ACII小鼠长(P<0.05,n=5)oCol2aCre：Pten^iACK小鼠表型，较Pte』如：ACH小鼠的侏儒表网有所缓解。结论采用茶于Cre/LoxP系统的条件性基因敲除策略，获得了在软骨细胞中敲除rrEN丛因的FGFK3壇强型突变小鼠，表別分析初步显示，软骨细胞特异性敲

4、除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小風侏儒衣型。该小取的获彳为研究P13K/AKT仃号通路在FGFR3炎变介导的软T1•生氏抑制中的作用提供了实验动物平台。关键词：PTEN;FCFR3;软竹发仔不全；条件性划因敲除；小取InitialphenotypeanalysisonchondrocytePTENconditionalknockoutmicegenerationfromFGFR3gainoffunctionmutantLEIZixian.QIHuabing.SUNan,elal.Sta

5、teKeyIxiboraloryofTrauma,BurrviandCombinedInjury,TraumaCenter,InstituleofSurgeryResearch.DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversitytChongqing400042,ChinaAbstract：ObjectiveToobtainthechondrocytePTENconditionalknockoutmicefromFGFR3gainoffunebonmutantsandini

6、tialphenotypeanalysis.MethodsToproducethechondrocytePTENconditionalknockoutmice,thePten"""micewerecrossedwithCol2aCremiceexpressingCrerecombinaseinchondrocytespecifically;toproducethePten^^:ACHmice,Pten^^1micewerecrossedwithFGKI13gainoffunctionmutantmice(Fgf

7、r3cwo*mice)whichpresentsaACHgenotype,thedaughterheterozygotemicethencrosswitheachother;Finally*thechondrocytePTENconditionalknockoutmicewithFGFR3gainoffunctionmutant(Col2aCre:Pte』""0":ACH)wereobtainedbycrossingCol2aCre：Ptenn<，M/no1andPtenn

8、ughtermicewereidentifiedwithPCRassay9PTENknockouteffectwasdelectedwithimmunofluorescentstaining,andphenotypesdifferencebetweengenotypeswerecomparedwithX-rayplatefilmphotography・ResultsChondrocyt