人工抗原的电喷雾质谱分析方法研究

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1、河北科技大学硕士学位论文人工抗原的电喷雾质谱分析方法研究姓名：李伟岭中请学位级别：硕士:药物化学指导教师：张越;薛飞群20100601食品安全是全球最关注的一大热点，农药和兽药的不合理使用甚至滥用导致食用农产品及动物源性食品残留超标，已成为食品安全的突出问题Z-O免疫分析技术特别是酶联免疫吸附分析技术作为一项快速检测技术，以其抗原抗体反应的高专属性，测定方法简单、快速、灵敏度高、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点,在农药和兽药残留分析中展示了广泛的应用而景。大多数农药和曽药都是小分了物质（半抗原）

2、，无法直接诱导动物机体产生特异性的抗体，但将其与蛋口质载体偶联制备成人工抗原后，可产生特异性的抗体，这是小分子免疫分析的基本模式。在这项技术中，人工抗原的合成与鉴定是建立免疫分析方法的両提和关键。因此，建立一种简易、快捷、可靠的鉴定人工抗原的方法是一项非常有意义的工作。本论文分别以氨基酸、多肽和蛋白质为载体与半抗原偶联，研究不同分子量的载体制得的偶联物的电喷雾质谱带电规律。研究发现：半抗原•氨基酸偶联物以带单电荷为主；当以多肽或蛋白质为载体时，由于反应产物的复朵性必须釆用高效液相色谱或超高效液相色谱

3、分离后才能进行质谱分析；半抗原■多肽偶联物以带多电荷为主，其单电荷质谱峰的信号强度很弱，并且由半抗原与多肽的偶联反应推断半抗原与载体蛋口的偶联产物是不同偶联比率的混合物；半抗原・BSA偶联物与BSA的超高效液相色谱保留时间和电喷雾质谱均有差别，说明电喷雾质谱可以有效鉴定人工抗原是否偶联成功。但是，受质谱仪分辨率的限制经Maxcent分了量软件去卷积处理后，很难计算出确切的分了量。本论文述采用IR、UV、SDS-PAGE、荧光光谱和基质辅助激光解吸电离■飞行时间■质谱对人工抗原进行鉴定。结果表明：利用

4、IR鉴定人工抗原理论上可行，但有时小分子半抗原的结构信息被掩埋在蛋白分子中而无法鉴定人工抗原是否偶联成功；UV也有与IR类似的情况；如果人工抗原与载体蛋白的分了量差界较小，SDS-PAGE也无法用于人工抗原的鉴定；荧光光谱和基质辅助激光解吸电离■飞行时间■质谱能够明确鉴定人工抗原是否偶联成功。其屮，荧光光谱鉴定人工抗原的相关报道尚未看到，此法亦是本论文的创新之处。关键词电喷雾电离；偶联反应；人工抗原；载体；半抗原；质荷比AbstractFoodsafetyisamajorconcernofthewo

5、rld'shotspots.Theirrationaluseortheabuseofpesticidesandveterinarydmgsledtoresiduesexceedingthestandardoffoodsafetyinedibleagriculturalproductsandanimal-derivedfood,whichhasbecomeoneoftheoutstandingproblems.Immunoassaytechnology,especiallyenzyme-linkedi

6、mmunosorbentassaytechnology(ELISA),isarapiddetectiontechnology,whichshowsawiderangeofapplicationprospectsintheresidueanalysisofpesticidesandveterinarydrugs.Thereasonisthatthetechnologytakesadvantageofantigen-antibodyreactionwithhighspecificity,andthatt

7、hedeterminationmethodissimple,rapid,highsensitivity,lowcostandsuitableforon-sitebulksampleselection,etc..Duetomostofpesticidesandveterinarydrugsbesmallmolecules(haptens),theycannotdirectlyinduceanimalbodytoproducespecificantibodies・Butartificialantigen

8、conjugatedthroughhaptenandcarriermayproducespecificantibodies.Thisisthebasicpatternofimmunoassay.Inthistechnique,thesynthesisandidentificationofartificialantigenisthepremiseandkeytoestablishimmunoassaymethod.Therefore,itisaverymeaningfu