杀灭多子小瓜虫的中草药活性成分的鉴定、药效、毒理与杀虫机理研究

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1、暨南大学博士学位论文题名(中英对照)：杀灭多子小瓜虫的中草药活性成分的鉴定、药效、毒理与杀虫机理研究Identification,effects,toxicityandparasiticidalmechanismofantiparasiticcompoundsfromtheChineseherbalmedicineplantsagainstIchthyophthiriusmultifiliis作者姓名：王彬指导教师姓名：张其中学位、职称：博士、教授学科、专业名称：水生生物学论文提交日期：2014

2、年4月20日论文答辩日期：2014年5月30日答辩委员会主席：论文评阅人：学位授予单位和日期：万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关

3、保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：万方数据暨南大学博士学位论文杀灭多子小瓜虫的中草药活性成分的鉴定、药效、毒理与杀虫机理研究摘要多子小瓜虫(Ichthyo

4、phthiriusmultifiliis)是一种淡水和咸淡水寄生原生动物，属纤毛虫纲(Oligohymenophorea)、凹口科(Ophryoglenidae)、小瓜虫属(Ichthyophthirius)，其生活史分为成虫期（滋养体期）、包囊期和感染幼虫期三个阶段。该虫主要寄生在鱼鳃、鱼鳍和皮肤上，导致寄生处上皮细胞增生，出现许多小白点，因此又称“白点病”。该病分布广泛，遍及全球，周年发生，我国每年4月~6月和9月~11月(水温为20℃~24℃)是小瓜虫病的流行盛期。多子小瓜虫对寄主无严格选

5、择性，主要危害鱼苗和鱼种，发病快、死亡率高、难治愈。过去几十年主要用汞制剂和孔雀石绿防治小瓜虫病，取得了良好效果，但由于这些药残留高，毒性大，具有致癌致畸作用，已被各国政府禁止使用。目前缺乏安全有效的防治小瓜虫病的药物。因此，研究开发杀灭小瓜虫的安全、高效、环保的新型绿色渔药迫在眉睫。我国有着广阔的中草药资源和使用中草药治疗疾病的悠久历史。其毒副作用小，易降解，残留低，环境友好。近年来，中草药在水产动物病害防治中使用越来越广泛，但是，存在很大盲目性，主要借鉴中草药在人畜疾病治疗中的经验，中草药防

6、治水产疾病的相关研究严重滞后，极大地影响了防治疾病的效果和技术的推广。迫切需要开展中草药防治水产疾病的系统研究，开发出安全、高效、质量可控的源自中草药的新型环保渔药。本研究从110种中草药通过杀小瓜虫活性初筛具有杀虫作用的植物种类，采用活性追踪法，分离纯化鉴定杀小瓜虫活性化合物，研究其药效、毒理、残留消除过程以及杀虫机理，结果如下：1.杀灭多子小瓜虫的中草药植物种类筛选：通过110种中草药水提物对多子小瓜虫成虫离体杀灭效果研究，发现7种中草药对多子小瓜虫成虫具有较好的杀灭作用，其中生姜抑杀效果最

7、好，对多子小瓜虫幼虫和成虫的最低致死浓度均为0.1g/L，致死时间分别为154±3min和202±4min，对包囊的最低致死浓度均为0.2g/L，致死时间为276±4min。5种生姜萃取物中，石油醚萃取物杀灭多子小瓜虫幼虫、成虫和包囊效果最佳，致死浓度分别为10mg/L、50mg/L和40mg/L。2.姜油树脂杀灭多子小瓜虫活性成分的追踪、分离纯化与鉴定：依次用石油醚、乙酸乙酯、甲醇萃取姜油树脂，杀虫活性最佳的乙酸乙酯萃取物通过3次硅胶层析柱洗脱、反相高效液相色谱纯化、薄层层析检测以及活性追踪测

8、定等方法，最终分离纯化得到三种活性单体化合物，结合质谱(ESI-MS)、质子核磁共振谱(1H-NMR)和核磁共振碳谱(13C-I万方数据暨南大学博士学位论文杀灭多子小瓜虫的中草药活性成分的鉴定、药效、毒理与杀虫机理研究NMR)的波谱数据对其结构进行鉴定，最终确定这三种活性单体分别为10-姜酚(C21H34O4)、6-脱氢姜烯酚(C17H22O3)、6-脱氢-10-姜酚(C21H32O4)，双因素方差对比分析表明10-姜酚活性最佳。3.10-姜酚杀灭多子小瓜虫药效研究：10-姜酚在4h内全部杀死成