用组合肽配体库技术(Combinatorial Peptide Ligand Library,CPLL)对尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)毒的“隐形蛋白质组”的研究

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1、硕士学位论文用组合肽配体库技术（CombinatorialPeptideLigandLibrary,CPLL）对尖吻蝮蛇（Agkistrodonacutus）毒的“隐形蛋白质组”的研究研究生：张荣春指导老师：余晓东教授学科专业：生物化学与分子生物学所在学院：生命科学学院二○一四年四月万方数据重庆师范大学硕士论文摘要重庆师范大学硕士学位论文用组合肽配体库技术（CombinatorialPeptideLigandLibrary,CPLL）对尖吻蝮蛇（Agkistrodonacutus）毒的“隐形蛋白质组”的研究硕士研究生：张荣春指导教师：余晓东教授学科专业：生物化学与分子生

2、物学所在学院：生命科学学院重庆师范大学2014年04月万方数据重庆师范大学硕士论文摘要AThesisSubmittedtoChongqingNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterUsingCombinatorialPeptideLigandLibrary(CPLL)ApproachesinexploringtheVenomHiddenProteomeofAgkistrodonacutusvenomCandidate：RongchunZhangSupervisor：

3、ProfessorXiaodongYuMajor：BiochemistryandmolecularbiologyCollege：CollegeoflifescienceChongqingNormalUniversityApril，2014万方数据重庆师范大学硕士论文摘要用组合肽配体库技术（CPLL）对尖吻蝮蛇（A.acutus）毒的―隐形蛋白质组‖的研究摘要尖吻蝮蛇（A.acutus）是我国十大毒蛇之一，在我国分布广泛。其毒液是由多种具有生物活性的蛋白质、多肽、酶类和其它小分子物质组分构成。据报道，我国尖吻蝮蛇伤发生率较高。目前，临床上治疗蛇伤的药物主要是抗蛇毒血清，但

4、现有的抗毒血清常有免疫交叉反应和过敏反应等副作用。为制备出副作用小，疗效佳的抗蛇毒血清，需要对其蛇毒组分的全貌作全面的解析。目前，关于蛇毒全貌的研究均采用的是蛋白组学经典技术，但由于其无法检测和分析到蛇毒蛋白质组中较低丰度和超低丰度的蛋白质组分(即―隐形蛋白质组‖)的局限性，制约了人们认识蛇毒蛋白质组的真正全貌。组合肽配体库（CPLL）是在多孔的固相层析介质上合成和连接上由不同氨基酸残基组成的各种各样的数百万的短肽配体如常用的六肽配体，构成一套组合的短肽配体库，该肽库可以用于富集蛋白质组中的低丰度甚至超低丰度的蛋白质。本研究拟利用CPLL技术，在整体水平上对尖吻蝮蛇毒进

5、行全景式分析：首先采用SDS-PAGE与RP-HPLC相结合分析尖吻蝮蛇毒中的―常规蛋白质‖；然后利用组合肽配体库（CPLL）技术富集尖吻蝮蛇毒蛋白质中的―隐形蛋白质‖，通过2-DE结合质谱技术，并利用生物信息学技术来挖掘这些隐形蛋白质。结果显示，RP-HPLC分离尖吻蝮蛇粗毒蛋白后的38个收集峰经SDS-PAGE，总共检测58条蛋白质谱带，其中16条带丰度较高。粗毒的双向电泳检测出128个质点，分子量均在100kDa以内，在30kDa-67kDa，12kDa-18kDa高丰度表达；在45.0kDa-66.2kDa区间有中等表达水平的蛋白分布。酸性蛋白质（等电点在3.0

6、-6.0之间）的种类较多，中性蛋白（等电点在6.0-8.0之间）次之，碱性蛋白最少。与粗毒对比，CPLL富集后的样品中10kDa-15kDa的高丰度蛋白含量明显降低。在富集后的样品中15kDa-20kDa，PI值在4.0-6.0之间及20kDa-30kDa，等电点7.5-8.5的2个区域呈现出9个特异的蛋白质点。将该I万方数据重庆师范大学硕士论文摘要区域中肉眼可见的全部24个蛋白质点切胶进行胶内酶解，并做质谱分析鉴定。对质谱原始数据分析后，共鉴定到18个蛋白，5个蛋白未能匹配。猜测这5个蛋白可能是未被发现的―隐形蛋白质‖。未能匹配的5个蛋白，还需要与其它质谱方法进行结合

7、，并与来自其它系统性研究的资料(如cDNA文库)印证，方可得出最终结论。另外，所鉴别蛋白的功能，还有待进一步的研究与表征。本研究对于进一步筛选具有生物学活性成分的分子及完善并尽快建立尖吻蝮蛇毒蛋白质资源数据库具有极为重要的生物学意义。同时为蛇毒进化史的研究、蛇伤治疗、抗蛇毒血清的制备以及新型药物的开发提供了基础资料。关键词：尖吻蝮蛇毒蛋白；组合肽配体库技术；―隐形蛋白质组‖；质谱；蛋白质组II万方数据重庆师范大学硕士论文英文摘要UsingCPLLapproachesinexploringtheHiddenProteomeofA.acutu