基因诊断与治疗

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1、基因诊断与治疗基因诊断遗传因素环境因素性状（疾病）基因诊断的概念：应用分子生物学方法检测受检者遗传物质的结构(DNA)或表达水平(mRNA、蛋白质)的变化而作出或辅助临床诊断的技术基因诊断的内容1、基因序列分析（定性）2、基因突变分析（定性）3、测定基因剂量和拷贝数（定量）4、基因表达产物分析（定量或定性）5、检测是否存在外源基因（定性或定量）基因诊断的特点针对性强特异性强、灵敏度高应用范围广无组织和发育特异性常用基因诊断的技术核酸分子杂交Southernblot、Northernblot、斑点杂交、原位杂交PCR技术DNA测序基因芯片技术

2、其它常用技术PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）扩增片段长度多态性分析（Amp-FLP）等位基因特异性寡核苷酸杂交（ASO、PCR-ASO）单链构象多态性（PCR-SSCP）变性高效液相色谱（DHPLC）基因诊断的策略基因诊断可根据致病基因及突变性质是否已知来制定其相应策略基因诊断的策略直接基因诊断间接基因诊断直接基因诊断概念：直接检测致病基因本身的结构性改变（如单个碱基的缺失、插入、置换；片段的缺失、易位、重复以及动态突变等）适用范围：致病基因序列已知且基因结构异常已知的遗传病的诊断特点：1、不必收集家系标本、方法简单、可

3、靠（首选方法）2、由于遗传异质性的原因，以及多数遗传病的基因异常尚属未知，故目前能直接诊断的病种虽日益增多，但仍然比较有限间接基因诊断概念：通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推断受检者是否获得了带有致病基因的染色体，称为间接基因诊断适用范围：致病基因尚属未知、或致病基因已知但异常未知的遗传病诊断特点：1、不需了解致病基因结构，适用于大多数由未知基因缺陷或致病基因已知但异常未知所引起的遗传病的诊断2、家系收集繁琐、常由于家系不够完整、标记与致病基因重组、标记杂合度有限而难以完成连锁：指同一条染色体上位置相邻的基因或DNA片段，常被一起传递而

4、没有发生重组连锁分析（linkageanalysis）：利用与致病基因相连的某些可检出的DNA片段作为遗传标志，通过鉴定遗传标志的存在而判断个体是否带有致病基因微卫星DNA(STRs)重复单元2-6bp，重复区大多几十-几百bp，分散在基因组中，大多不存在于编码序列内，具有较高的多态性。呈现孟德尔式遗传。目前微卫星DNA已经发现了２万余个位点TTCAGCTAGCTCAGCAGCAGCAGCAGCAGAGCTTGCAAGTCGATCGAGTCGTCGTCGTCGTCGTCTCGAACG常用检出方法：Amp-FLP、Southernblot基因

5、诊断的应用疾病的诊断遗传病的诊断：单基因病、染色体病肿瘤的基因诊断获得性疾病的诊断疾病的预测遗传性疾病的预测：产前诊断、植入前诊断、携带者筛查获得性疾病的预测个体识别、亲子鉴定基因缺失型遗传病的诊断α地贫的基因诊断αα/αααα/--αα/α-α-/----/--10kb4kb┌─────────────┐┴──────┴───┴─│──────│14kb│────│10kbαα└─────────────┘5’───□──□─────3’↑BamHI↑BamHIα5'────□────3'(α)↑↑5'───────3'(--)杜氏/贝氏

6、进行性肌营养不良的缺失诊断exonbpNP│Pro535━━━━││││3410━━━━││43357━━←││││50271━━━━││13238━━━━││││6202━━━━││47181━━━━││││60139━━━━││52113━━━━│└────────────┘成年型多囊肾病的连锁分析诊断Ⅰ●─┬─□1│2└────┬───┬───┬───┬───┐Ⅱ●■○□◇？12345kb5.7━━━━3.4━━━2.4━━━━━━━3’HVR作为探针、PvuII酶切基因诊断的展望发展趋势应用现有的DNA分析技术不断扩大诊断病种加强对

7、疾病发病的分子基础研究：不仅表现在从基因结构上阐明疾病的分子缺陷，而且进一步探索在转录和翻译水平上疾病发生的分子病理学发展方向对常见病、多发病（如心血管疾病、糖尿病、肿瘤等）进行诊断母体外周血中胎儿细胞分析技术胚胎着床前诊断，将人类的遗传缺陷控制在最早阶段基因治疗（genetherapy）概念：是通过一定方式将正常基因或有治疗作用的DNA片段导入人体靶细胞以矫正或置换致病基因，从而达到治疗目的从广义上讲，凡是采用分子生物学技术在核酸水平上对疾病进行治疗都属于基因治疗导入的目的基因在宿主细胞内存在方式:整合或整合状态对象：体细胞、生殖细胞19

8、90.9.14首例基因治疗4岁女孩严重免疫缺陷症(SCID)缺乏腺苷酸脱氨酶(ADA)2--脱氧腺苷含量升高毒性严重破坏免疫功能ADA基因逆转录病毒载体靶细胞为病人淋巴细胞回输基